A. mesenterica samentrekking en ontspanning Studies met behulp van geautomatiseerde Wire Myography

Summary

Een geautomatiseerde myography methode voor kracht metingen in geïsoleerde mesenteriale bloedvaten wordt beschreven. Er werken een Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A om reacties te bepalen fenylefrine en extracellulair calcium. De methode zorgt voor consistente bepaling van de isometrische reacties op agonisten in kleine vaten van de diameters van 60 – 300 urn, onafhankelijk van elkaar.

Abstract

Proximale weerstand schepen, zoals de mesenteriale bloedvaten, dragen substantieel bij aan de perifere weerstand. Deze kleine schepen van tussen de 100 tot 400 micrometer diameter functie in de eerste plaats in het sturen van de bloedtoevoer naar verschillende organen op basis van de algemene eisen van het lichaam. De rat a. mesenterica heeft een diameter van meer dan 100 micrometer. De myography techniek, het eerst beschreven door Mulvay en Halpern ^1, was gebaseerd op de methode voorgesteld door Bevan en Osher ^2. De techniek geeft informatie over kleine schepen onder isometrische omstandigheden, waarbij aanzienlijke verkorting van de spier bereiding wordt voorkomen. Aangezien de productie van kracht en gevoeligheid van vaartuigen naar de verschillende agonisten is afhankelijk van de mate van stretch, volgens de actieve spanning-lengte relatie, is het essentieel om krimp studies uit te voeren onder isometrische omstandigheden om de naleving van de montage van kabels te voorkomen. Roestvrijstalen draden verdienen de voorkeur boven wolfraam draden als gevolg van oxidatie van de laatste, die opgenomen reacties ³ beïnvloedt. De techniek maakt de vergelijking van agonist-geïnduceerde contracties van gemonteerde schepen te verkrijgen bewijs voor de normale functie van vasculaire gladde spiercellen receptoren.

Hebben we aangetoond in diverse studies dat geïsoleerde mesenterica slagaders die zijn aangegaan met phenylyephrine ontspannen na toevoeging van cumulatieve concentraties van extracellulair calcium (Ca ^{2 +} _e). De bevindingen leidde ons naar dat perivasculaire gevoelszenuwen, die de G-eiwit gekoppelde Ca ^{2 +-sensing} receptor (CaR) express slot bemiddelen deze vasorelaxation reactie. Met behulp van een geautomatiseerde draad myography methode, we zien hier dat mesenterica slagaders van Wistar, Dahl zout-gevoelige (DS) en Dahl zout-bestendig (DR) anders ratten reageren op Ca ^{2 +} _e. Weefsels van Wistar ratten werden hogere Ca ^{2 +-gevoeligheid} in vergelijking met die van DR en DS. Verminderde CaR uitdrukking in mesenteriale arteriën van DS ratten correleert met een verminderde Ca ^{2 +} _{e-geïnduceerde} relaxatie van geïsoleerde, pre-gecontracteerde slagaders. De gegevens suggereren dat de auto nodig is voor ontspanning van mesenteriale bloedvaten onder verhoogde adrenerge toon, zoals bij hypertensie, en geef een eigen gebrek van de CaR signaalweg in Dahl dieren, die veel strenger in de DS.

De methode is handig bij het ​​bepalen van vasculaire reactiviteit ex vivo in mesenteriale weerstand slagaders en soortgelijke kleine bloedvaten en vergelijkingen tussen de verschillende agonisten en / of antagonisten kunnen eenvoudig en consistent worden beoordeeld side-by-side ^6,7,8.

Protocol

1. Isolatie van ratten mesenteriale kleine slagader Verdoven van dieren met isofluraan in een gesloten kamer en veeg de buik met alcohol. Voer een mid-line laparotomie naar mesenteriale bed bloot te leggen. Met een schaar, verwijdert u ongeveer 85 cm van de darm met het voeden bloedvaten met de a. mesenterica superior. Snij het proximale uiteinde van de darm gedeelte dicht bij de pylorus en het distale einde de buurt van de ileo-coecal kruising. Segmenten van de darm geïsoleerd zijn van r…

Discussion

Hypertensie is een belangrijke oorzaak van cardiovasculaire, cerebrale en renale morbiditeit / mortaliteit. Het optreden van hypertensie is hoog in de bevolking en zout-gevoelige hypertensie is vooral hoog in de vergrijzing van de bevolking, en vaker voor bij zwarten dan blanken. Dit is vermoedelijk te wijten aan de neiging van de zwarten aan natrium te behouden in hun nieren ^9. Zout-gevoeligheid is een belangrijke factor voor nierziekte en wordt geassocieerd met endotheliale dysfunctie, maar het mechanisme i…

Materials

Name of equipment/ reagent	Company	Catalogue number	Comments(optional)
Auto Dual Wire Myograph System-510A DMT-USA, Inc.	Atlanta, GA.	100151
PowerLab/4SP Data Acquisition System	ADInstruments, Colorado Springs, CO.	ML750	New models with 4-16 input channels are available.
Dell Dimension XPS Gen 4 Computer	Dell
Stemi SV II (Apo) Dissection Microscope with Ocular	Carl Zeiss International.
Wistar, Dahl salt-sensitive, Dahl salt-resistant rats	Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN.
Rodent chow	Harland Tekland, Madison, WI.
Phenylephrine	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO.
Other chemicals			All chemicals used were of the purest grades available commercially.