A contração da artéria mesentérica e Estudos Relaxamento Usando Miografia Fio Automated
Summary
Um método automatizado para medições Miografia vigor em artérias mesentéricas isoladas é descrito. Ele emprega um Mulvany-Halpern Auto Myograph fio duplo 510A para determinar as respostas à fenilefrina e cálcio extracelular. O método permite a determinação consistente de respostas isométrica aos agonistas em pequenos vasos de diâmetros de 60 – 300 mm, de forma independente.
Abstract
Vasos de resistência proximal, tais como as artérias mesentéricas, contribuem substancialmente para a resistência periférica. Esses pequenos vasos entre 100-400 mM em função de diâmetro principalmente no direcionamento do fluxo de sangue para vários órgãos de acordo com os requisitos gerais do corpo. A artéria mesentérica de ratos tem um diâmetro superior a 100 mm. A técnica Miografia, primeiramente descrita por Mulvay e Halpern 1, foi baseada no método proposto por Bevan e Osher 2. A técnica fornece informações sobre navios de pequeno porte em condições isométricas, onde o encurtamento substancial da preparação muscular é impedida. Desde produção de força e sensibilidade de navios para diferentes agonistas é dependente da extensão do trecho, de acordo com a relação tensão-comprimento ativo, é essencial a realização de estudos de contração isométrica em condições para impedir o cumprimento dos fios de montagem. Fios de aço inoxidável são preferíveis aos fios de tungstênio por causa da oxidação deste último, que afeta as respostas registradas 3. A técnica permite a comparação de agonista-induzida contrações dos vasos montados para obter provas para a função normal de receptores vascular das células musculares lisas.
Temos demonstrado em vários estudos que artérias mesentéricas isoladas que são contratados com phenylyephrine relaxar com a adição de concentrações cumulativas de cálcio extracelular (Ca 2 + e). As descobertas levaram-nos a concluir que os nervos sensoriais perivascular, que expressam a proteína G acoplada Ca 2 + receptor-sensing (CaR), mediar esta resposta vasorelaxamento. Utilizando um método automatizado Miografia fio, mostramos aqui que artérias mesentéricas de Wistar, Dahl sensíveis ao sal (DS) e Dahl sal-resistentes (DR) ratos respondem diferentemente ao Ca 2 + e. Tecidos de ratos Wistar mostrou Ca 2 + maior sensibilidade em comparação com os de DR e DS. CaR expressão reduzida em artérias mesentéricas de ratos DS correlaciona-se com Ca 2 + reduzida de relaxamento e-induzida de isoladas, pré-contraídos artérias. Os dados sugerem que o carro é necessário para o relaxamento das artérias mesentérica sob tônus adrenérgico aumentado, como ocorre na hipertensão, e indicar um defeito inerente na via de sinalização CaR em animais Dahl, que é muito mais grave no DS.
O método é útil para determinar a reatividade vascular ex vivo nas artérias mesentéricas de resistência e similares pequenos vasos sanguíneos e comparações entre diferentes agonistas e / ou antagonistas podem ser facilmente e constantemente avaliada lado a lado 6,7,8.
Protocol
Discussion
A hipertensão é uma das principais causas de morbidade cardiovascular, renal e cerebral / mortalidade. A ocorrência de hipertensão é alta na população e hipertensão sal-sensível é particularmente elevada na população idosa, e mais prevalente em negros do que brancos. Este é acreditado para ser devido à tendência dos negros para reter sódio em seus rins 9. Sal-sensibilidade é um fator importante que contribui para a doença renal e está associada à disfunção endotelial, mas o mecanismo nã…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
O projeto descrito foi apoiada por números Award HL064761 R01, R25 HL059868, 1SC1 HL099139 e P20 MD000175 forma National Institutes of Health. O conteúdo é da exclusiva responsabilidade dos autores e não representam, necessariamente, a posição oficial do National Institutes of Health.
Materials
| Name of equipment/ reagent | Company | Catalogue number | Comments(optional) |
|---|---|---|---|
| Auto Dual Wire Myograph System-510A DMT-USA, Inc. | Atlanta, GA. | 100151 | |
| PowerLab/4SP Data Acquisition System | ADInstruments, Colorado Springs, CO. | ML750 | New models with 4-16 input channels are available. |
| Dell Dimension XPS Gen 4 Computer | Dell | ||
| Stemi SV II (Apo) Dissection Microscope with Ocular | Carl Zeiss International. | ||
| Wistar, Dahl salt-sensitive, Dahl salt-resistant rats | Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN. | ||
| Rodent chow | Harland Tekland, Madison, WI. | ||
| Phenylephrine | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. | ||
| Other chemicals | All chemicals used were of the purest grades available commercially. |
Riferimenti
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature. 260, 617-619 (1976).
- Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents Actions. 2, 257-260 (1972).
- Mulvany, M. J. Procedures for investigating of small vessels using small vessel myograph. DMT Danish Myo Technology. , (2004).
- Angus, J. A., Wright, C. E. Techniques to study the pharmacodynamics of isolated large and small blood vessels. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 44, 395-407 (2000).
- Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels. J. Physiol. 275, 85-101 (1978).
- Lindhorst, J., Alexander, N., Blignaut, J., Rayner, B. Differences in hypertension between blacks and whites: an overview. Cardiovasc. J. Afr. 18, 241-247 (2007).
- Eley, S. L., Allen, C. M., Williams, C. L., Bukosi, R. D., Pointer, M. A. Action of thiazide on renal interstitial calcium. Am. J. Hypertens. 21, 814-819 (2008).
- Palmer, C. E., Rudd, M. A., Bujoski, R. D. Renal interstitial Ca2+ during sodium loading of normotensive and Dal-salt hypertensive rats. Am. J. Hypertens. 16, 771-776 (2003).
- Hurwitz, S. Homeostatic control of plasma calcium concentration. Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 31, 41-100 (1996).
- Brown, E. M., MacLeod, R. J. Extracellular sensing and extracellular calcium signaling. Physiol. Rev. 81, 239-297 (2001).
- Breitwieser, G. E. Extracellular calcium as an integrator of tissue function. Int. J. Biochem. Cell Biol. 40, 1467-1480 (2008).
- Mupanomunda, M. M., Wang, Y., Bukoski, R. D. Effect of chronic sensory denervation on Ca2+-induced relaxation of isolated mesenteric resistance arteries. Am. J. Physiol. 274, 1655-1661 (1998).
- Mupanomunda, M. M., Ishioka, N., Bukoski, R. D. Interstitial Ca2+ undergoes dynamic changes sufficient to stimulate nerve-dependent Ca2+-induced relaxation. Am. J. Physiol. 276, 1035-1042 (1999).
- Mupanomunda, M. M., Tian, B., Ishioka, N., Bukoski, R. D. Renal interstitial Ca2+. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F644-F649 (2000).
- Awumey, E. M., Hill, S. K., Diz, D. I., Bukoski, R. D. Cytochrome P-450 metabolites of 2-arachidonoylglycerol play a role in Ca2+-induced relaxation of rat mesenteric arteries. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2363-2370 (2008).
- Chen, W., Bergsman, J. B., Wang, X., Gilkey, G., Pierpoint, C. R., Daniel, E. A., Awumey, E. M., Dauban, P., Dodd, R. H., Ruat, M., Smith, S. M. Presynaptic external calcium signaling involves the calcium-sensing receptor in neocortical nerve terminals. PloS One. 5, e8563-e8563 (2010).
- Bukoski, R. D. The perivascular sensory nerve Ca2+ receptor and blood pressure regulation: a hypothesis. Am. J. Hypertens. 11, 1117-1123 (1998).
- Bukoski, R. D. Dietary Ca2+ and blood pressure: evidence that Ca2+-sensing receptor activated sensory nerve dilator activity couples changes in interstitial Ca2+ with vascular. 16, 218-221 (2001).
