Самоорганизующихся монослоев (ЗРК), составленный из длинной цепи алканов тиолов на золото обеспечивают четко определенные субстраты для образования белка моделей и камеру. Микроконтактной печати hexadecanethiol использованием полидиметилсилоксан (PDMS) штамп следует засыпка с гликоля прекращено алканов тиоловых мономера производит шаблон, в котором белки и клетки адсорбировать только штамп hexadecanethiol регионе.
Микроконтактной печати обеспечивает быстрое, очень воспроизводимый метод для создания четко определенных субстратов узорной. Микроконтактной 1 Во время печати можно использовать для непосредственно печатать большое число молекул, включая белки, ДНК, 2, 3 и силанов, 4 формирование собственного монослоев (ЗРК) с длинной цепочкой алкан тиолов на золото обеспечивает простой способ ограничить белки и клетки для конкретных моделей содержащих клей и устойчивые регионы. Это заключение может быть использован для контроля морфологии клеток и используется для изучения различных вопросов в белке и клеточной биологии. Здесь мы опишем общий метод создания четко определенных белков модели для сотовых исследования 5 Этот процесс включает в себя три этапа:. Производство мастер узорной использованием фотолитографии, создание штампа PDMS, и микроконтактной печать золотом покрытие подложки. Как только рисунком, эти субстраты культуры клеток способны ограничиваясь белков и / или клетки (первичные клетки или клеточные линии), чтобы узор.
Использование самоорганизующихся монослоя химии позволяет точный контроль над узорной белок / клетка клей регионов и неклейкой регионах; это не может быть достигнута с использованием прямого штамповки белка. Hexadecanethiol, длинной цепи алканов тиоловых используются на этапе печати микроконтакта производит гидрофобной поверхности, которая легко адсорбирует белка из раствора. Гликоля прекращено тиол, используемый для засыпки непечатные регионов подложке, создается монослой, которая устойчива к адсорбции белка и, следовательно, роста клеток. Шесть Эти тиоловых мономеров производят хорошо структурированный монослоев, что точно определить регионы субстрат, который может поддерживать адсорбции белка и роста клеток. В результате этих субстратов полезны для широкого круга приложений от изучения межклеточных поведения 7 до создания микроэлектроники 8.
Хотя другие виды монослоя химии были использованы для исследования клеточных культур, в том числе работы из нашей группы, используя trichlorosilanes для создания шаблонов непосредственно на стеклянных подложках, 9 узорной монослоев формируется из алкан тиолов на золото являются прямыми, чтобы подготовиться. Более того, мономеров, используемых для подготовки монослоя имеются в продаже, стабильной, и не требуют хранения или обработки в инертной атмосфере. Узорные субстратов приготовленный из тиолов алканов также могут быть переработаны и использованы повторно несколько раз, сохраняя камеру 10.
Ряд вопросов может возникнуть в литографических производство мастер использовал для создания штампа PDMS. Недодержка из сопротивляться покрытием пластин приводит туманные и нечеткие модели и переоблучения противостоять покрытие пластин приводит к увеличении или отсутствие возможно?…
The authors have nothing to disclose.
Мы хотели бы выразить признательность всей группы Maurer в Вашингтонском университете, чье совокупное знание сделало этого протокола возможно. Финансирование этих работ осуществляется Национальным институтом психического здоровья (1R01MH085495).
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
Silicon wafer | Wafer Reclaim Services | 2 inch | |
Spin coater/hot plate | Brewer Science | Cee 200CB Spin-Bake System | |
AZ9245 Photoresist | Mays Chemical Company | 105880034-1160 | |
Direct-write photolithography system | Microtech s.r.l. | LW325 LaserWriter System | |
Mask Aligner | HTG | 3HR | |
AZ 400K Developer | Mays Chemical Company | 105880018-1160 | |
Sylgard 182 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | ||
25 mm no. 1 round glass coverslips | VWR | 16004-310 | |
Plasma Oxidizer | Diener | Femto | |
Titanium pieces Kamis | Incorporated | 99.95% pure | |
Gold pellets | Kamis Incorporated | 99.999% pure | |
Electron-beam evaporator | Kurt J. Lesker | PVD 75 Thin Film Deposition System | with electron-beam accessory |
Hexadecanethiol | Alfa Aesar | A11362 | |
1-mercaptoundec-11-yl)tetra(ethyleneglycol) | Sigma Aldrich | 674508 | |
Ethanol | Pharmco-aaper | 111000200 | 200 proof, absolute |
Parafilm | VWR | 52858-000 | |
DPBS | VWR | 4500-434 | Without calcium and magnesium |
Mouse Laminin I | VWR | 95036-762 | |
Human Plasma Fibronectin | Invitrogen | 33016-015 | |
AlexaFluor® 647 carboxylic acid, succinimidyl ester | Invitrogen | A-20006 | |
MitoTracker Red 580 | Invitrogen | M22425 | |
AlexaFluor® 350 carboxylic acid, succinimidyl ester | Invitrogen | A-10168 | |
Anti-laminin antibody | Fisher Scientific | AB2034MI |