Na imagem de bioluminescência vivo Tumor de mama Dynamics Hipóxia metástase do cancro cerebral em um modelo de rato
Summary
Imagem de bioluminescência de hipóxia induzida a atividade do fator-1α é aplicada para monitorar o desenvolvimento hipóxia intracraniana tumor em um câncer de mama modelo de cérebro de rato metástase.
Abstract
É bem reconhecido que a hipóxia tumor desempenha um papel importante na promoção da progressão maligna e afetando negativamente a resposta terapêutica. Há pouco conhecimento sobre in situ, em hipóxia, vivo tumor intracraniano durante o desenvolvimento de tumores cerebrais malignos por causa da falta de meios eficientes para monitorá-lo nestes tumores profundos ortotópico. Imagem de bioluminescência (BLI), baseado na detecção de luz emitida por células vivas expressando um gene da luciferase, foi rapidamente adotado para a investigação do cancro, em particular, para avaliar o crescimento do tumor ou mudanças tamanho do tumor em resposta ao tratamento em estudos com animais pré-clínicos. Além disso, ao expressar um gene repórter sob o controle de uma seqüência promotora, a expressão de genes específicos podem ser monitorados de forma não invasiva por BLI. Sob estresse hipóxico, as respostas de sinalização são mediadas principalmente através da indução de hipóxia factor-1α (HIF-1α) para dirigir a transcrição de vários genes. Portanto, temos utilizado uma construção repórter HIF-1α, 5HRE-ODD-luc, estavelmente transfectadas em câncer de mama humano MDA-MB231 células (MDA-MB231/5HRE-ODD-luc). In vitro ensaio HIF-1α bioluminescência é realizada por incubando as células transfectadas em uma câmara de hipóxia (0,1% O 2) por 24 horas antes de BLI, enquanto as células em normóxia (21% O 2) servir como controle. Significativamente maior fluxo de fótons observados para as células em hipóxia sugere uma ligação de HIF-1α aumentou para seu promotor (elementos HRE), em comparação com aqueles em normóxia. As células são injetadas diretamente no cérebro de camundongo para estabelecer um modelo de câncer de mama metástase cerebral. Na imagem de bioluminescência vivo da dinâmica hipóxia tumor é iniciado 2 semanas após o implante e repetido uma vez por semana. BLI revela aumento sinais de luz a partir do cérebro como o tumor progride, indicando aumento da hipóxia tumor intracraniano. Estudos histológicos e imunohistoquímicos são usados para confirmar a no resultado de imagem in vivo. Aqui, vamos introduzir abordagens de ensaio di vitro HIF-1α bioluminescência, criação cirúrgica de uma metástase cerebral de câncer de mama em camundongos nude e aplicação de imagem de bioluminescência em vivo para monitorar hipóxia tumor intracraniano.
Protocol
Discussion
De mama câncer de metástase cerebral ocorre em 30% dos pacientes com câncer de mama no estágio IV. Ela está associada com alta morbidade e mortalidade, com sobrevida mediana de 13 meses 6. Há uma necessidade de ter modelos animais apropriados para imitar esta doença clinicamente devastadora, a fim de facilitar a nossa compreensão da sua iniciação intracraniana e progressão, bem como perfis fisiopatológicos. Aqui, temos desenvolvido um modelo ortotópico de câncer de mama metástase cerebral atrav…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudo é apoiado em parte pelo DOD Prêmio IDEA Câncer de Mama W81XWH-08-1-0583 e NIH / NCI CA141348-01A1 (DZ) e FAMRI prêmio cientista clínico (DS). Infra-estrutura de imagem é fornecido pelo Southwestern Programa de Pequenas Pesquisa Animal de imagem suportados em parte pela U24 CA126608 e Câncer Simmons Center (P30 CA142543) e NIH 1S10RR024757-01.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| D-luciferin | Gold Biotechnology | L-123 | 120 mg/kg in PBS in a total volume of 80 μl for in vivo study |
| Isoflurane | Baxter International Inc. | 1001936060 | |
| Matrigel | BD Biosciences | 354234 | |
| Hamilton syringe | Hamilton Company | 1701 | |
| 32G Hamilton needle | Hamilton Company | 7803-04 | |
| Hypoxia chamber | Billups-Rothenberg, Inc. | MIC-101 | |
| Bioluminescence imaging system | Caliper Life Sciences | IVIS Spectrum system | |
| G418 | Fisher scientific | SV3006901 |
Riferimenti
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