Summary

视网膜节的形态分析

Published: February 19, 2012
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Summary

该视频演示了三种类型,其中包括视网膜内的核层厚度测量,定量视网膜神经节细胞(RGCs)的数量,并测量视网膜神经节细胞的大小,形态分析。该技术可以提供一个简单,但科学的形态分析的平台。

Abstract

已被用于检查视网膜疾病视网膜节的形态分析。举例来说,神经细胞均显着失去了在大鼠模型中视网膜神经节细胞层(RGCL)与N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体诱导的兴奋1,视网膜缺血再灌注损伤的23青光眼。 INL和内网状层(IPL),厚度减少了与胞二磷胆碱治疗老鼠的眼睛红藻酸介导的谷氨酸4逆转。修改RGC的密度和体躯大小不同的药物治疗,升高眼内压3,5,6眼睛观察。因此,有客观分析视网膜morphometries的方法可能是在评价视网膜病变和治疗策略的有效性具有十分重要的意义。

视网膜结构是多层次和几种不同类型的神经元EXIST在视网膜上。视网膜细胞数量,细胞的大小和不同层的厚度,如形态参数是比细胞培养系统更复杂。在早期,这些参数可以使用其他的商业成像软件检测。该值通常是相对值,和不断变化的精确值,可能需要进一步的精确计算。此外,细胞大小和形态的跟踪可能不准确,灵敏的统计分析不够,特别是在慢性青光眼模型。在本协议所使用的测量提供了一个更精确和更容易的方式。与细胞的大小和行的绝对长度可以直接和容易被复制到其他文件。例如,我们追踪内层和最外层的INL在核边缘,形成一条线,然后使用该软件绘制成90度角来衡量的厚度。虽然没有软件的帮助,也许斜行和视网膜厚度的变化可能个别观察员之间不重复的。此外,视网膜神经节细胞的数量和密度也可以量化。该协议成功的减少在定量的视网膜功能的变异,增加检测微小变化的敏感性。

这部影片将展示三种类型的视网膜节的形态分析。它们包括测量的INL厚度,定量视网膜神经节细胞的数量和绝对值测量视网膜神经节细胞的大小。这三种分析进行与立体声调查(医疗保险基金生命科学 – 公司MicroBrightField)。该技术可以提供一个简单,但科学的形态分析的平台。

Protocol

1。工具显微镜,尼康立体声调查,医疗保险基金的生物科技公司 – MicroBrightField 2。准备任何形态分析工作之前,每个视网膜样本是在4微米厚的切片,经过H&E染色。 视网膜节分为4个区域 – 上周边地区,中部地区上,较低的周边地区,中部地区较低。 后定义的区域,每个区域的图像尼康明亮的光束显微镜10×40倍?…

Discussion

1。如何获得更精确​​的厚度测量?

您可以放大图像,通过点击“放大”按钮,并留在跟踪窗口点击。 INL的边界可以清楚地看到。如果线的一角,是不是在外部边界的INL的,我们可以调整行的编辑模式下。有关行采摘后,右击跟踪窗口,选择“插入点在选定的轮廓”。有一点可以添加外部边界,而加点应该是在同一直线上。然后,你必须删除原有的点和线可以得到一个更精?…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

眼科研究在本实验室工作的支持,杜鹃(1972)美国卫生署助理基金会,捐赠基金,香港大学专业进修学院的小项目基金(20097176185)。

Materials

Name of the reagent Tipo Company Catalogue number
Stereo Investigator MBF Bioscience Analysis Software MicroBright Field  
Microscope Olympus BX51 Olympus Corporation BX51

Riferimenti

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Citazione di questo articolo
Chan, T. F., Chiu, K., Lok, C. K. M., Ho, W. L., So, K., Chang, R. C. Morphometric Analyses of Retinal Sections. J. Vis. Exp. (60), e3377, doi:10.3791/3377 (2012).

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