Morfometriske Analyser af Retina Sektioner

Summary

Videoen viser tre typer morfometriske analyse af nethinden, som omfatter måling af indre kernelag tykkelse, der kvantificerer antallet af retina-ganglieceller (rGCS) og måle størrelsen af ​​rGCS. Teknikken kan tilbyde en enkel, men videnskabelig platform for morfometriske analyser.

Abstract

Morfometriske analyse af retinale afsnit er blevet anvendt i behandlingen af ​​retinale sygdomme. For eksempel blev neuronale celler signifikant tabt i retina-ganglieceller lag (RGCL) i rottemodeller med N-methyl-D-aspartat (NMDA)-induceret excitotoksicitet ¹ retinal iskæmi-reperfusionsskade ² og glaukom ^3. Reduktion af INL og indre netformige lag (IPL) tykkelser blev vendt med citicolin behandling rotter øjne underkastet kaininsyre-medieret glutamatexcitotoksicitet ^4. Ændring af RGC tæthed og Soma størrelser blev observeret med forskellige medicinske behandlingsmetoder i øjnene med forhøjet intraokulært tryk ^3,5,6. Derfor kan have objektive metoder til at analysere de retinale morphometries være af stor betydning ved vurderingen af ​​retinale patologier og effektiviteten af ​​terapeutiske strategier.

Den nethindestruktur er flere lag og flere forskellige typer af neuroner exist i nethinden. De morfometriske parametre retina, såsom celletal, cellestørrelse og tykkelsen af ​​forskellige lag er mere kompleks end den cellekultursystem. Tidligt, kan disse parametre påvises ved hjælp af anden kommerciel imaging software. Værdierne er normalt af relative værdi, og der skiftes til den præcise værdi kan kræve yderligere nøjagtig beregning. Ligeledes kan sporing af cellestørrelsen og morfologi ikke er nøjagtig og følsom nok til statistisk analyse, især kronisk glaukom modellen. Målingerne, der bruges i denne protokol gav en mere præcis og nem måde. Og den absolutte længde af linien og størrelsen af ​​cellen kan rapporteres direkte og let at blive kopieret til andre filer. For eksempel spores vi margen af ​​den indre og ydre mest kerner i INL og dannede en linje derpå ved hjælp af software til at trække en 90 graders vinkel til at måle tykkelsen. Mens uden hjælp af softwaren, kan linjen måske skæve og skiftende af retinal tykkelsevære reproducerbar blandt individuelle observatører. Derudover kan antallet og densiteten af ​​rGCS også kvantificeres. Denne protokol held reducerer variabiliteten i kvantificering træk ved nethinden, forøger følsomheden i detektion minimale ændringer.

Denne video vil vise tre typer morfometriske analyser af retinale sektioner. De omfatter måling af INL tykkelse, der kvantificerer antallet af rGCS og måle størrelsen af ​​rGCS i absolut værdi. Disse tre analyser er udført med Stereo Investigator (MBF Bioscience – MicroBrightField, Inc.). Teknikken kan tilbyde en enkel, men videnskabelig platform for morfometriske analyser.

Protocol

1. Værktøj Microscope, Nikon Stereo Investigator, MBF Bioscience – MicroBrightField, Inc. 2. Forberedelse Før du arbejder på en morfometrisk analyse, er hver nethinden prøve sektioneret ved 4 micron tykkelse og gennemgår H & E farvning. Nethinden er delt i 4 regioner – øvre perifere område, det øvre centrale region, den nedre periferi, og den nedre centrale region. Efter de regioner, er et bil…

Discussion

1. Sådan får du en mere præcis tykkelse måling?

Du kan forstørre billedet ved at klikke på "Zoom ind" knappen og venstre klik i opsporingen vinduet. Den INL kant ses tydeligt. Hvis spidsen af ​​linien ikke er ved den ydre kant af INL, kan man justere linje under redigering tilstand. Efter picking den pågældende strækning, skal du klikke til højre opsporing vinduet og vælg "Indsæt Point i Valgte Contour". Et punkt kan tilføjes ved den ydre grænse, mens den e…

Materials

Name of the reagent	Tipo	Company	Catalogue number
Stereo Investigator	MBF Bioscience Analysis Software	MicroBright Field
Microscope	Olympus BX51	Olympus Corporation	BX51