Morfometrische analyses van het netvlies secties
Summary
Deze video toont drie soorten morfometrische analyses van het netvlies, waaronder het meten van de binnenste nucleaire laag dikte, het kwantificeren van het aantal retinale ganglioncellen (RGC) en het meten van de afmetingen van RGC. De techniek kan bieden een eenvoudige, maar wetenschappelijk platform voor morfometrische analyses.
Abstract
Morfometrische analyses van het netvlies onderdelen zijn gebruikt bij de behandeling van retinale aandoeningen. Voor voorbeelden werden neuronale cellen significant verlies in de retinale ganglion cellaag (RGCL) in ratmodellen met N-methyl-D-aspartaat-(NMDA)-geïnduceerde excitotoxiciteit 1 retinale ischemie-reperfusie 2 en glaucoom 3. Vermindering van INL en innerlijke plexiform laag (IPL) diktes werden teruggedraaid met Citicoline behandeling in ratten de ogen blootgesteld aan kainic zuur-gemedieerde glutamaat excitotoxiciteit 4. Wijziging van RGC dichtheid en soma maten werden waargenomen met verschillende behandelingen met medicijnen in de ogen met een verhoogde intra-oculaire druk 3,5,6. Daarom kan met objectieve methoden van het analyseren van de retinale morphometries van grote betekenis zijn bij de evaluatie van retinale aandoeningen en de effectiviteit van therapeutische strategieën.
Het netvlies structuur is multi-lagen en verschillende soorten neuronen Exist in het netvlies. De morfometrische parameters van het netvlies, zoals het aantal cellen, celgrootte en de dikte van de verschillende lagen zijn complexer dan de celcultuur. Vroeg op, kunnen deze parameters worden gedetecteerd met behulp van andere commerciële imaging software. De waarden zijn gewoonlijk van relatieve waarde, en de overgang naar de juiste waarde kan verder nauwkeurige berekening nodig. Ook kan het traceren van de celgrootte en morfologie niet nauwkeurig en gevoelig genoeg statistische analyse van met name de chronische glaucoom model. De metingen die in dit protocol voorzien in een meer nauwkeurige en eenvoudige manier. En de absolute lengte van de lijn en de grootte van de cel direct gemakkelijk worden gekopieerd naar andere bestanden worden gerapporteerd. Zo volgden we de rand van de binnenste en buitenste de meeste kernen in de INL en vormden een lijn dan met behulp van de software om een hoek van 90 graden te vestigen op de dikte te meten. Terwijl zonder de hulp van de software, de lijn misschien schuin en het veranderen van retinale dikte kanniet herhaalbaar zijn bij individuele waarnemers. Bovendien kan het aantal en de dichtheid van RGC worden gekwantificeerd. Dit protocol vermindert met succes de variabiliteit in kwantificeren van kenmerken van het netvlies, verhoogt de gevoeligheid bij het opsporen van minimale veranderingen.
Deze video tonen drie soorten morfometrische analyse van het netvlies secties. Zij omvatten meten INL dikte, dat het aantal RGC en meting van de grootte van RGC in absolute waarde. Deze drie analyses worden uitgevoerd met Stereo Investigator (MBF bio – MicroBrightField, Inc.) De techniek kan bieden een eenvoudige, maar wetenschappelijk platform voor morfometrische analyses.
Protocol
Discussion
1. Hoe maak je een meer nauwkeurige dikte meting te verkrijgen?
U kunt het beeld vergroten door te klikken op "Zoom in" knop en de linker muisknop in het opsporen venster. De INL grens is duidelijk te zien. Als de tip van de lijn is niet aan de buitenste rand van het INL, kunnen we de lijn aan te passen onder de bewerkingsmodus. Na het plukken van de betrokken lijn met de rechtermuisknop op het opsporen en kies "Plaats Point in geselecteerde contour". Een punt kan worden toe…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Het werk op het oog onderzoek in dit laboratorium wordt ondersteund door de Amerikaanse Health Assistant Foundation, Azalea (1972) Endowment Fund, en HKU fonds voor kleinschalige projecten (20097176185).
Materials
| Name of the reagent | Tipo | Company | Catalogue number |
| Stereo Investigator | MBF Bioscience Analysis Software | MicroBright Field | |
| Microscope | Olympus BX51 | Olympus Corporation | BX51 |
Riferimenti
- Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)–Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. Apoptosis and caspases after ischemia-reperfusion injury in rat retina. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 40, 967-975 (1999).
- Luo, X. G., Chiu, K., Lau, H. S., Lee, V. W. H., Yung, K. K. L., So, K. F. The Selective Vulnerability of Retinal Ganglion Cells in Rat Chronic Ocular Hypertension Model at Early Phase. Cellular and Molecular Neurobiology. 29 (8), 1143-1151 (2009).
- Han, Y. S., Chung, I. Y., Park, J. M., Yu, J. M. Neuroprotective effect of citicoline on retinal cell damage induced by kainic acid in rats. Korean J. Ophthalmol. 19, 219-226 (2005).
- Hernandez, M., Urcola, J. H. Retinal ganglion cell neuroprotection in a rat model of glaucoma following brimonidine, latanoprost or combined treatments. Exp. Eye Res. 86, 798-806 (2008).
- Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma. Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).
