Morphometrische Analysen von Netzhautschnitte
Summary
Dieses Video zeigt drei Arten von morphometrischen Analysen der Netzhaut, die Messung der inneren Körnerschicht Dicke, indem die Anzahl der retinalen Ganglienzellen (RGZ) und Messung der Größen von RGCs gehören. Die Technik bietet eine einfache, aber wissenschaftliche Plattform für morphometrische Analysen.
Abstract
Morphometrische Analyse von Netzhautschnitte in Prüfung retinalen Krankheiten verwendet. Beispiele wurden neuronalen Zellen signifikant im retinalen Ganglienzellen (RGCL) im Rattenmodell mit N-Methyl-D-Aspartat verloren (NMDA) Exzitotoxizität 1, retinalen Ischämie-Reperfusionsverletzung 2 und 3-Glaukom induziert. Reduzierung der INL und inneren plexiformen Schicht (IPL) Dicken wurden mit Citicolin Behandlung bei Ratten 'Augen unterzogen Kainsäure-vermittelte Glutamatexzitotoxizität 4 umgekehrt. Änderung der RGC Dichte und Soma Größen wurden mit verschiedenen medikamentösen Behandlungen bei Augen mit erhöhtem Augeninnendruck 3,5,6 beobachtet. Daher kann mit objektiven Verfahren zur Analyse der retinalen morphometries von großer Bedeutung bei der Bewertung von retinalen Pathologien und die Wirksamkeit von therapeutischen Strategien sein.
Das Retina-Struktur ist Multi-Schichten und verschiedene Arten von Neuronen Exist in der Netzhaut. Die morphometrischen Parameter der Retina, wie Zellzahl, Zellgröße und die Dicke der verschiedenen Schichten sind komplexer als der Zellkultur. Frühe auf, können diese Parameter unter Verwendung anderer kommerzieller Bildbearbeitungssoftware werden. Die Werte sind in der Regel von relativer Wert, und das Ändern der genaue Wert kann weiter eine genaue Berechnung müssen. Auch kann das Tracing der Zellgröße und Morphologie nicht genau und empfindlich genug für statistische Auswertung, vor allem in der chronischen Glaukom-Modell. Die Messungen in diesem Protokoll verwendet werden, sofern eine genauere und einfache Weise. Und die absolute Länge der Leitung und der Größe der Zelle kann direkt und einfach zu anderen Dateien kopiert werden gemeldet werden. Zum Beispiel verfolgt wir den Rand der inneren und äußeren meisten Kerne in der INL und eine Linie gebildet ist dann mit der Software, um eine 90-Grad-Winkel zu zeichnen, um die Dicke zu messen. Während ohne die Hilfe der Software kann die Leitung vielleicht schräg und personelle Veränderungen der Netzhautdickenicht wiederholbar sein zwischen den einzelnen Beobachtern. Darüber hinaus kann die Anzahl und Dichte von RGCs ebenfalls quantifiziert werden. Dieses Protokoll erfolgreich verringert die Variabilität in der quantitativen Merkmale der Netzhaut, erhöht die Empfindlichkeit bei der Erkennung minimale Änderungen.
Dieses Video wird zeigen, drei Arten von morphometrischen Analysen der retinalen Abschnitten. Dazu gehören die Messung der Dicke INL, indem die Anzahl der RGCs und Messen der Größen von RGCs absolut. Diese drei Analysen werden mit Stereo-Investigator (- MicroBrightField, Inc. MBF Bioscience) durchgeführt. Die Technik bietet eine einfache, aber wissenschaftliche Plattform für morphometrische Analysen.
Protocol
Discussion
1. Wie, um eine genauere Messung zu erhalten Dicke?
Sie können das Bild durch Klicken auf "Zoom in"-Taste vergrößern und klicken Sie links im Fenster verfolgen. Der INL-Grenze ist deutlich zu erkennen. Wenn die Spitze der Linie ist nicht an der äußeren Grenze des INL, können wir die Zeile unter dem Bearbeiten-Modus einzustellen. Nach dem Pflücken werden die betreffenden Zeile der rechten Maustaste auf das Tracing-Fenster und wählen Sie "Einfügen Point in ausgewählten Ko…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Arbeit am Auge Forschung in diesem Labor wird von der American Health Assistant-Stiftung, Azalee (1972) Endowment Fund, und HKU Small Project Fund (20097176185) unterstützt.
Materials
| Name of the reagent | Tipo | Company | Catalogue number |
| Stereo Investigator | MBF Bioscience Analysis Software | MicroBright Field | |
| Microscope | Olympus BX51 | Olympus Corporation | BX51 |
Riferimenti
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