Morfometriske Analyser av netthinnens Seksjoner

Summary

Denne videoen viser tre typer morfometriske analyser av netthinnen, som inkluderer måling av indre kjernefysiske tykkelse, kvantifisere antallet netthinnens ganglieceller (RGCs) og måle størrelser av RGCs. Teknikken kan tilby en enkel, men faglig plattform for morfometriske analyser.

Abstract

Morfometriske analyser av netthinnens seksjoner har blitt brukt i å undersøke retinal sykdommer. For eksempler, ble nevrale celler betydelig tapt i retinal ganglion celle lag (RGCL) i rotter modeller med N-metyl-D-aspartat (NMDA)-indusert ^en excitotoxicity, retinal ischemi-reperfusjon skade ² og glaukom ^tre. Reduksjon av INL og indre plexiform lag (IPL) tykkelser ble reversert med citicoline behandling i rottenes øyne utsatt for kainic syre-mediert glutamat excitotoxicity ^4. Endring av RGC tetthet og soma størrelser ble observert med ulike medikamentelle behandlinger i øynene med forhøyet intraokulært trykk ^3,5,6. Derfor kan ha objektive metoder for å analysere netthinnens morphometries være av stor betydning i vurderingen av netthinnens patologi og effektiviteten av terapeutiske strategier.

Netthinnens struktur er multi-lag og flere forskjellige typer nerveceller Exist i netthinnen. De morfometriske parametere i netthinnen som celle nummer, celle størrelse og tykkelse av ulike lagene er mer kompleks enn den cellekultur systemet. Tidlig på, kan disse parametrene kan oppdages ved hjelp av annen kommersiell bildebehandling. Verdiene er normalt av relative verdi, og endre til den nøyaktige verdien kan trenge ytterligere nøyaktig beregning. Dessuten kan spore av cellen størrelse og morfologi ikke være nøyaktig og følsom nok for statistikk analyse, spesielt i kronisk glaukom modellen. Målingene brukes i denne protokollen gitt en mer presis og enkel måte. Og den absolutte lengden av linjen og størrelse av cellen kan rapporteres direkte og lett å bli kopiert til andre filer. For eksempel spores vi grensen til indre og ytre mest kjerner i INL og dannet en linje deretter bruke programvare for å tegne en 90 graders vinkel for å måle tykkelsen. Mens uten hjelp av programvaren, linjen kanskje skrå og endring av retinal tykkelse kanikke være repeterbare blant enkelte observatører. I tillegg kan antallet og tettheten av RGCs også skal tallfestes. Denne protokollen reduserer vellykket variasjonen i quantitating funksjoner i netthinnen, øker følsomheten i å oppdage små endringer.

Denne videoen vil demonstrere tre typer morfometriske analyser av netthinnens seksjoner. De omfatter måling av INL tykkelse, kvantifisere antallet RGCs og måle størrelser av RGCs i absolutt verdi. Disse tre analysene er utført med Stereo Investigator (MBF biovitenskap – MicroBrightField, Inc.). Teknikken kan tilby en enkel, men faglig plattform for morfometriske analyser.

Protocol

1. Verktøy Mikroskop, Nikon Stereo Investigator, MBF biovitenskap – MicroBrightField, Inc. 2. Forberedelse Før arbeider på noen morfometriske analyser, er hver retina prøve seksjoneres i 4 micron tykkelse og gjennomgår H & E farging. Netthinnen delen er delt inn i 4 regioner – øvre perifer regionen, øvre sentrale regionen, jo lavere perifer regionen, og den nedre sentrale regionen. Etter å ha d…

Discussion

1. Hvordan få en mer nøyaktig tykkelse måling?

Du kan forstørre bildet ved å klikke på "Zoom inn"-knappen og venstre klikk i sporing vinduet. Den INL grensen kan ses tydelig. Hvis tuppen av linjen er ikke på den ytre grensen av INL, kan vi justere linjen under redigeringsmodus. Etter å ha hentet den aktuelle linjen, høyreklikk på oppsporing vinduet og velg "Sett Point i Selected Contour". Et punkt kan legges ved ytre grense, mens punktet tilføyes, bør være langs…

Materials

Name of the reagent	Tipo	Company	Catalogue number
Stereo Investigator	MBF Bioscience Analysis Software	MicroBright Field
Microscope	Olympus BX51	Olympus Corporation	BX51