Análises morfométricas de secções da retina

Summary

Este vídeo demonstra três tipos de análise morfométrica da retina, que incluem a medição da espessura da camada nuclear interna, a quantificação do número de células ganglionares da retina (RGCs) e medindo os tamanhos dos RGCs. A técnica pode oferecer uma plataforma simples, mas científica para análises morfométricas.

Abstract

Análises morfométricas de secções da retina têm sido utilizados na análise doenças da retina. Para exemplos, as células neuronais foram significativamente perdido na camada de células ganglionares da retina (RGCL) em modelos de ratos com N-metil-D-aspartato (NMDA)-induzida excitotoxicidade ^1, lesão de isquemia-reperfusão da retina e glaucoma ^{2 3.} Redução do INL e interior camada plexiforme (IPL) espessuras foram invertidos com o tratamento com citicolina em olhos de ratos submetidos a excitotoxicidade do glutamato mediada pelo ácido caínico ^4. Alteração da densidade de RGC e tamanhos do soma foram observadas com tratamentos medicamentosos diferentes em olhos com pressão intra-ocular elevada ^3,5,6. Portanto, ter métodos objetivos de analisar as morphometries na retina podem ser de grande importância na avaliação de patologias da retina e da eficácia de estratégias terapêuticas.

A estrutura da retina é multi-camadas e vários tipos diferentes de neurônios exir na retina. Os parâmetros morfométricos do retina tais como o número de células, o tamanho da célula e da espessura das camadas de diferentes são mais complexas do que o sistema de cultura celular. Logo no início, estes parâmetros podem ser detectadas usando software de imagem de outro comercial. Os valores são normalmente de valor relativo, e mudando para o valor exacto pode necessitar de cálculo mais preciso. Além disso, o traçado do tamanho da célula e morfologia pode não ser preciso e suficientemente sensível para a análise estatística, especialmente no modelo de glaucoma crónico. As medições utilizados neste protocolo fornecido um modo mais preciso e rápido. E o comprimento absoluto da linha e tamanho da célula pode ser directa e fácil de ser copiado para outros arquivos. Por exemplo, descrevemos a história da margem de núcleos mais interior e exterior, no INL e formou uma linha, em seguida, usando o software para desenhar um ângulo de 90 graus para medir a espessura. Embora sem a ajuda do software, a linha oblíqua e talvez a mudança de espessura da retina podenão ser repetitivo entre observadores individuais. Além disso, o número e densidade de RGCs também pode ser quantificada. Este protocolo com sucesso diminui a variabilidade na quantificação características da retina, aumenta a sensibilidade na detecção de alterações mínimas.

Este vídeo vai demonstrar três tipos de análises morfométricas das secções da retina. Eles incluem a medição da espessura INL, quantificar o número de RGCs e medição dos tamanhos de RGCs em valor absoluto. Estas três análises são realizadas com Stereo Investigator (MBF Bioscience – MicroBrightField, Inc.). A técnica pode oferecer uma plataforma simples, mas científica para análises morfométricas.

Protocol

1. Ferramentas Microscópio, Nikon Investigador Stereo, MBF Bioscience – MicroBrightField, Inc. 2. Preparação Antes de trabalhar em qualquer análise morfométrica, cada amostra de retina é seccionado em 4 mícrons de espessura e sofre a coloração H & E. A secção de retina é dividida em 4 regiões – região periférica superior, a região central superior, a parte inferior região periférica, e quanto m…

Discussion

1. Como obter uma medição de espessura mais precisa?

Você pode ampliar a imagem clicando em "Zoom in" e à esquerda, clique na janela de rastreamento. A fronteira INL pode ser visto claramente. Se a ponta da linha não está na borda externa do INL, podemos ajustar a linha sob o modo de edição. Após escolher a linha em causa, com o botão direito na janela de rastreamento e escolha "Ponto de Inserção na Contour Selecionado". Um ponto pode ser adicionado na fronteira …

Materials

Name of the reagent	Tipo	Company	Catalogue number
Stereo Investigator	MBF Bioscience Analysis Software	MicroBright Field
Microscope	Olympus BX51	Olympus Corporation	BX51