Морфометрические анализы сетчатки Разделы
Summary
Это видео демонстрирует три типа морфометрических анализ сетчатки, которые включают в себя измерение внутренней ядерной толщины слоя, количественной количество ганглиозных клеток сетчатки (РГК) и измерения размеров РГК. Этот метод может предложить простой, но научная платформа для морфометрического анализа.
Abstract
Морфометрические анализы сетчатки раздела были использованы при изучении заболеваний сетчатки. Для примера, нервных клеток были значительно потеряли в сетчатке слой ганглиозных клеток (RGCL) у крыс модели с N-метил-D-аспартата (NMDA)-индуцированной токсичности 1, сетчатки ишемии травмы 2 и глаукома 3. Сокращение INL и внутренний слой плексиформные (IPL) толщиной были отменены с цитиколина лечение в глаза крыс подвергали каиновой кислоты глутамат-опосредованной токсичности 4. Изменение плотности РГК и размеров сома наблюдаются различные лекарств в глаз повышенного внутриглазного давления 3,5,6. Поэтому, имея объективных методов анализа сетчатки morphometries может иметь большое значение в оценке патологии сетчатки и эффективность терапевтических стратегий.
Сетчатки структуры многослойной и различные виды нейронов Exiм в сетчатке. Морфометрических параметров сетчатки, таких как сотовые номера, размера ячейки и толщины различных слоев являются более сложными, чем система клеточной культуры. Ранее эти параметры могут быть обнаружены с помощью других коммерческих программ обработки изображений. Значения, как правило, относительной стоимости, а также изменения к точному значению, возможно, потребуется дальнейшее точный расчет. Кроме того, отслеживание размера и морфологии клетки не могут быть точными и достаточно чувствительным для статистического анализа, особенно в хронической модели глаукомы. Измерения, используемые в настоящем протоколе обеспечивает более точный и простой способ. И абсолютная длина линии и размер клетки могут быть представлены непосредственно и легко быть скопированы на другие файлы. Например, мы проследили краю внутренней и внешней большинства ядер в INL и образовали линии, то с помощью программного обеспечения сделать 90 градусов для измерения толщины. Хотя без помощи программного обеспечения, линия может быть косой и изменение толщины сетчатки можетне должно быть повторяющихся между отдельными наблюдателями. Кроме того, количество и плотность РГК также могут быть определены количественно. Этот протокол успешно снижает вариабельность количественного функции сетчатки, повышает чувствительность выявления минимальных изменений.
Это видео покажет три вида морфометрических анализ сетчатки разделов. Они включают в себя измерение толщины INL, количественного числа РГК и измерения размеров РГК по абсолютной величине. Эти три анализы проводятся с Stereo следователь (ФМС Bioscience – MicroBrightField, Inc.) Этот метод может предложить простой, но научная платформа для морфометрического анализа.
Protocol
Discussion
1. Как получить более точное измерение толщины?
Вы можете увеличить изображение, нажав кнопку "Увеличить" и щелкните левой кнопкой мыши в окне трассировки. INL границы хорошо видно. Если кончик линии, не на внешней границе INL, мы можем корректировать линию в режим редакт?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Работа над глазом исследования в этой лаборатории поддерживается American Health Foundation помощник, Азалия (1972), благотворительный фонд, и Фонд поддержки малого HKU проекта (20097176185).
Materials
| Name of the reagent | Tipo | Company | Catalogue number |
| Stereo Investigator | MBF Bioscience Analysis Software | MicroBright Field | |
| Microscope | Olympus BX51 | Olympus Corporation | BX51 |
Riferimenti
- Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)–Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. Apoptosis and caspases after ischemia-reperfusion injury in rat retina. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 40, 967-975 (1999).
- Luo, X. G., Chiu, K., Lau, H. S., Lee, V. W. H., Yung, K. K. L., So, K. F. The Selective Vulnerability of Retinal Ganglion Cells in Rat Chronic Ocular Hypertension Model at Early Phase. Cellular and Molecular Neurobiology. 29 (8), 1143-1151 (2009).
- Han, Y. S., Chung, I. Y., Park, J. M., Yu, J. M. Neuroprotective effect of citicoline on retinal cell damage induced by kainic acid in rats. Korean J. Ophthalmol. 19, 219-226 (2005).
- Hernandez, M., Urcola, J. H. Retinal ganglion cell neuroprotection in a rat model of glaucoma following brimonidine, latanoprost or combined treatments. Exp. Eye Res. 86, 798-806 (2008).
- Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma. Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).
