Vuxen-födda nervceller som uttrycker ChR2 kan manipuleras i slice elektrofysiologiska förberedelser för att undersöka deras bidrag till funktionen av luktsinnet neurala kretsar.
Standard skiva elektrofysiologi har gjort det möjligt för forskare att sond enskilda komponenter av neurala kretsar genom att spela in elektriska svaren från enskilda celler som svar på elektriska eller farmakologiska manipulationer 1,2. Med uppfinningen av metoder för att optiskt kontrollera genetiskt riktade neuron (optogenetics), forskare har nu en oöverträffad nivå av kontroll över specifika grupper av nervceller i standarden skiva beredning. Framför allt låter ljuskänsliga channelrhodopsin-2 (ChR2) forskare att aktivera nervceller med ljus 3,4. Genom att kombinera noggrann kalibrering av LED-baserade photostimulation av ChR2 med vanlig skiva elektrofysiologi, kan vi sond med närmare rollen som vuxna födda interneuronen i luktloben, den första centrala relä av luktsinnet. Använda virala uttryck för ChR2-YFP specifikt hos vuxna födda nervceller, kan vi kontrollera selektivt unga vuxna födda nervceller i en miljö av äldre ettd mogna nervceller. Vår optisk kontroll använder en enkel och billig LED-system, och vi visar hur detta system kan kalibreras för att förstå hur mycket ljus som behövs för att framkalla tillsatta aktiviteten i enstaka nervceller. Därför kan korta blixtar av blått ljus fjärrstyra skottlossningen mönster ChR2-transduced nyfödda celler.
De senaste åren har sett en explosion i popularitet optogenetic verktyg för neurovetenskaplig forskning 6. Som ett resultat, är det allt viktigare att sänka barriären för inresa för laboratorier som vill börja använda dessa nya verktyg. Här beskriver vi hur man genomför en enkel och billig installation i efterhand och kalibrering av en konventionell patch-clamp riggen så att den kan göra full-området optisk stimulering av channelrhodopsin-uttryckande nervceller. Framför allt använder vi denna …
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av livbolaget "AG2R-La-Mondiale", Ecole des Neurovetenskap de Paris (ENP), Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-neur-004" inom ramen för "ERA-NET NEURON "i FP7-program från Europeiska kommissionen och Pasteur stiftelsen. Sebastien Wagner stöddes av Letten stiftelsen.
Material | Tipo | Company | Catalogue No. |
Ketamine | 100 mg/ml | Imalgène 1000 | |
Xylazine | 2% | Rompun | |
NaCl | &nbps; | Sigma | S5886 |
KCl | Sigma | P5405 | |
MgSO4 | Sigma | M1880 | |
NaHCO3 | Sigma | S5761 | |
NaHPO4 | Sigma | S5011 | |
Glucose | Sigma | G7021 | |
CaCl2 | Sigma | C7902 | |
Agarose | Sigma | A9539 | |
Pipette Puller | P-97 | Sutter | |
Glass Capillaries | 1.5 mm O.D./1.17 mm I.D. | Harvard Apparatus | GC150T-10 |
LED array | Bridgelux | BXRA-C2000 | |
Collimating lens | 40 mm beam diameter | Thor Labs | LEDC1 |
Power supply | 2.8 amp | A1W Electronik | HKO2800 |
Optical power meter | Thor Labs | PM 100 | |
Heatsink | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
Fan | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
Vibratome | Leica | VT1200S |