Murine chirurgie superficielle des ganglions lymphatiques
Summary
Pour suivre la progression d'une réponse immunitaire au fil du temps au sein de la même souris, des ganglions lymphatiques peut être enlevé par chirurgie séquentielle. Ici, nous décrivons comment cette technique peut être réalisée.
Abstract
Dans le domaine de l'immunologie, de comprendre la progression d'une réponse immunitaire contre un vaccin, une infection ou une tumeur, la réponse est souvent suivie au fil du temps. De même, l'étude de l'homéostasie lymphocytaire nécessite des expériences de cours à temps. La réalisation de ces études dans la même souris est idéale pour réduire la variabilité expérimentale ainsi que le nombre de souris utilisées. De prélèvement de sang permet des performances des expériences de cours à temps, mais il ne donne que des informations sur les lymphocytes circulants et fournit un nombre limité de cellules 1-4. Depuis lymphocytes circulants dans le corps et résidant dans les ganglions lymphatiques ont des propriétés différentes, il est important d'examiner ces deux endroits. La suppression séquentielle des ganglions lymphatiques par la chirurgie offre une occasion unique de suivre une réponse immunitaire ou l'expansion des cellules immunitaires chez la souris même au fil du temps. En outre, cette technique donne entre 1-2×10 6 cellules par des ganglions lymphatiques qui est suffisant pour perform caractérisation phénotypique et / ou des tests fonctionnels. Séquentiel chirurgie ganglionnaire ou lymphadénectomie a été utilisé avec succès par nous et les autres 5-11. Ici, nous décrivons comment les ganglions lymphatiques brachial et inguinales peuvent être retirés en faisant une petite incision dans la peau d'une souris anesthésiée. Depuis la chirurgie est superficielle et fait rapidement, la souris récupère très rapidement, guérit bien et ne pas éprouver de la douleur excessive. Tous les deux jours, il est possible de récolter un ou deux ganglions lymphatiques permettant des expériences de cours à temps. Cette technique est donc appropriée pour étudier les caractéristiques des ganglions lymphatiques des lymphocytes résidant au fil du temps. Cette approche est adaptée aux différents modèles expérimentaux et nous pensons que de nombreux laboratoires gagneraient à effectuer séquentielles chirurgies des ganglions lymphatiques.
Protocol
Discussion
Nous avons décrit un protocole de chirurgie LN qui peut s'appliquer à de nombreux systèmes expérimentaux. Bien que très utile pour suivre les réponses immunitaires ou l'homéostasie des cellules immunitaires, cette technique a quelques limitations. Tout d'abord, seulement quatre ganglions peuvent être récoltés. Deuxièmement, la réponse immunitaire étudiée doit être systémique ou se produire dans les inguinaux superficiels ou brachiale (la peau de vidange) LNS. Enfin, le nombre de cellules réc…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous tenons à remercier Sylvie Lesage et tous les membres du laboratoire pour la lecture critique du protocole. Ce travail a été soutenu par une subvention (MOP-77545) à partir de l'Institut canadien de recherche en santé (IRSC). Nathalie Labrecque est soutenu par une bourse du FRSQ principal et Mélissa Mathieu a reçu une CRSNG Alexander Graham Bell Canada Bourses d'études supérieures.
Materials
| Reagent Name | Company | Catalog number | Comments |
| Graefe Fine Pattern Premium Forceps | Harvard Apparatus | 52-2144 | Strongly Curved, 10 cm (4 in), 0.8 mm tip |
| Michel Clip Applying and Removing Forceps | Harvard Apparatus | 52-3779 | 12.5 cm (5 in) |
| Michel Clip 100 | Harvard Apparatus | 52-3746 | 7.5-1.75 mm |
| Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) | Schering-Plough | ||
| Vetalar (Ketamine hydrochloride) | Boniche Animal Healthcare | DIN: 01989529 | |
| Rompun (Xylazine) | Bayer | DIN: 02169592 | |
| Isoflurane | ABBOTT | DIN: 02032384 | |
| Hypotears eye ointment | Novartis Ophtalmics | DIN: 02133288 | |
| Baxedin (Clorhexidine gluconate 2% in isopropyl alcohol 70%) | Omega | L0000017 | DIN: 02251477 |
Riferimenti
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