성장 Assays은 효모에서 Polyglutamine 독성을 평가하기 위해
Summary
본 원고는 효모에 polyglutamine의 독성 (polyQ) – 확장 단백질을 평가 삼 보완적인 프로토콜을 설명합니다<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. 이러한 프로토콜은 쉽게 효모의 다른 misfolded 단백질의 독성을 모니터링하기 위해 수정할 수 있습니다.
Abstract
단백질 misfolding 같은 알츠하이머 질환, 파킨슨병과 헌팅턴의 질병과 한 많은 인간의 질병, 특히 neurodegenerative 질병과 연관됩니다. 헌팅턴의 질병 (HD)은 단백질 huntingtin 이내 polyglutamine (polyQ) 지역의 비정상적인 확대로 인해 발생합니다. polyQ – 확장된 huntingtin 단백질이 비정상적 형태 (즉, 그것이 misfolds)을 attains 및 세포 독성에게 2를 일으 킵니다. 적어도 8 이상 neurodegenerative 질병은 Spinocerebellar Ataxias과 케네디의 질병 3를 포함해 polyQ – 확장에 의해 발생합니다.
모델 생물 효모는 polyQ – 확장을 표현 polyQ – 독성의 내부와 남북 분자 요인의 영향, 그리고 세포에 손상되는 세포 경로의 식별을 포함하여 polyQ – 독성의 세포 및 분자 기초에 중대한 통찰력을 촉진하고있다 단백질 3-8. 중요단조는 효모에서 발견된 polyQ – 독성의 여러 측면 따라서 polyQ – 독성 underpinning 기본적인 메커니즘의 발견을위한 효모 모델의 중요성을 보여주는 다른 실험적인 시스템에서와 HD 환자에서 샘플에 어느 정도까지 재현했다.
효모에 polyQ – 독성을 결정하는 직접적이고 비교적 간단한 방법 polyQ – 확장 단백질을 표현 효모 세포의 성장 결함을 측정하는 것입니다. 본 원고는 polyQ – 확장 단백질을 표현 효모 세포의 성장을 측정하여 효모에 polyQ – 독성을 결정하는 세 보완 실험적인 접근 방법을 설명합니다. 처음 두 실험 방법은 접시에 효모의 성장을 모니터링, 세 번째 접근법은 BioscreenC 악기를 사용하여 액체 효모 문화의 성장을 모니터링합니다.
또한이 원고는 효모 polyQ 모델을 다룰 때 발생할 수있는 실험적인 어려움을 설명하고 또는 피하기 위해 도움이 될 전략을 보여줍니다이러한 어려움을 최소화합니다. 여기에 설명된 프로토콜 식별 및 유전 경로 및 polyQ – 독성을 조절 작은 분자를 특성화하는 데 사용할 수 있습니다. 또한, 설명 assays는 효모 모델의 다른 질병 관련 misfolded 단백질에 의한 독성의 정확한 분석을위한 템플릿으로 사용될 수 있습니다.
Protocol
Discussion
본 원고는 독성 polyQ – 확장 단백질을 표현 효모 세포의 감소 성장을 바탕으로 모델 유기체 효모에 polyQ – 독성을 측정하는 세 보완적인 실험 방법을 설명합니다. 효모의 작업 polyQ – 확장 단백질 9,11,12의 misfolding과 독성을 포함한 단백질 misfolding의 기본 세포와 분자 메커니즘과 그 다음의 독성,로 심오한 통찰력을 제공하고있다. 여기에 제시된 프로토콜을 기반으로 실험은 이미 polyQ 독성 <sup…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Duennwald 연구소의 작품은 노화 연구 (멀리), 유전성 질병 재단 (HDF)와 윌리엄 우드 재단에 대한 미국 연방의 보조금에 의해 지원됩니다.
Materials
| Name of instrument | Company | Catalogue number |
| Frogger (6×8 pins) | V&P Scientific, San Diego | VP 407 AH |
| BioscreenC | Growthcurves USA | 5101370 |
| 100-well Honeycomb plates | Growthcurves USA | 9602550 |
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