संयंत्र में प्रोटीन बातचीत एक गेटवे संगत bimolecular प्रतिदीप्ति (BiFC) complementation सिस्टम का उपयोग की जांच
Summary
हम एक संयंत्र में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत का परीक्षण करने के लिए तकनीक विकसित की है. एक पीला फ्लोरोसेंट प्रोटीन (YFP) गैर अतिव्यापी दो टुकड़ों में विभाजित है. प्रत्येक टुकड़ा फ्रेम गेटवे प्रणाली के माध्यम से ब्याज की एक जीन में क्लोन है, संलयन प्रोटीन की अभिव्यक्ति को सक्रिय करने के. YFP संकेत के पुनर्गठन केवल तब होता है जब तहकीकात प्रोटीन बातचीत.
Abstract
हम एक BiFC vivo में दो प्रोटीनों के बीच बातचीत का परीक्षण करने के लिए तकनीक विकसित की है. यह दो गैर अतिव्यापी टुकड़ों में एक पीला फ्लोरोसेंट प्रोटीन (YFP) के बंटवारे के द्वारा पूरा किया है. प्रत्येक टुकड़ा फ्रेम ब्याज की एक जीन में क्लोन है. इन constructs तो Agrobacterium मध्यस्थता परिवर्तन के माध्यम से कर सकते हैं Nicotiana benthamiana में सह तब्दील, संलयन प्रोटीन की पारगमन अभिव्यक्ति की अनुमति. YFP संकेत के पुनर्गठन केवल तब होता है जब तहकीकात प्रोटीन 1-7 बातचीत. परीक्षण और प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत को मान्य करने के लिए, BiFC खमीर दो संकर परख (Y2H) के साथ एक साथ इस्तेमाल किया जा सकता है. यह अप्रत्यक्ष बातचीत जो Y2H में अनदेखा किया जा सकता का पता लगाने सकता है. गेटवे प्रौद्योगिकी एक सार्वभौमिक मंच है कि ब्याज की जीन (भारत सरकार) के शटल शोधकर्ताओं में सक्षम बनाता है कई अभिव्यक्ति और 8,9 संभव के रूप में कार्यात्मक विश्लेषण प्रणाली के रूप में. दोनों अभिविन्यास और पढ़ने फ्रेम प्रतिबंध एंजाइमों या ligation का उपयोग करने के लिए अभिव्यक्ति तैयार क्लोन बनाने के बिना रखा जा सकता है. एक परिणाम के रूप में, एक पुनः अनुक्रमण कदम प्रयोगों भर में लगातार परिणाम सुनिश्चित समाप्त कर सकते हैं. हम गेटवे संगत BiFC और Y2H वैक्टर जो आसान उपयोग उपकरणों के साथ शोधकर्ताओं प्रदान दोनों BiFC और Y2H assays 10 प्रदर्शन की एक श्रृंखला बनाई है. यहाँ, हम हमारे BiFC प्रणाली का उपयोग करने के लिए एन में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत का परीक्षण करने में आसानी प्रदर्शित benthamiana पौधों.
Protocol
Discussion
BiFC परख प्रोटीन बातचीत के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है. पारंपरिक Y2H परख के विपरीत, BiFC न केवल प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत के दृश्य की अनुमति देता है, लेकिन यह भी उप सेलुलर स्थानीयकरण के रूप में इस तरह के जट?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम पांडुलिपि और सामान्य प्रयोगशाला सहायता पढ़ने के लिए Vi गुयेन धन्यवाद.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Acetosyringone | Sigma | D134406 |
| MES hydrate | Sigma | M2933 |
| 1 mL slip-tip tuberculin syringe | BD | 309602 |
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