בפרוטוקול זה אנו משלבים RNAi בתיווך להשתקת גנים עם<em> In vivo</em> Assay diuresis ללמוד מציאה השפעות של גנים של עניין יש על הפרשת נוזל יתושים.
זה פרוטוקול וידאו מדגים טכניקה יעילה מציאה גן מסוים חרק ולנהל המבדק חדשנית למדוד את קצב הפרשת. בשיטה זו ניתן להשתמש כדי להשיג הבנה טובה יותר של תהליך diuresis ב חרקים שימושית במיוחד בחקר diuresis בדם, האכלה פרוקי רגליים כי הם מסוגלים לקחת כמויות עצומות של נוזל הדם בארוחה אחת.
מציאה זו RNAi בתיווך גנים בשילוב עם ב assay diuresis vivo פותחה על ידי המעבדה הנסן כדי לחקור את ההשפעות של מציאה RNAi בתיווך של גנים אקווה פורין על diuresis Aedes יתוש aegypti 1.
הפרוטוקול מוגדר ב-לשני חלקים: ההפגנה הראשונה מדגים כיצד לבנות מכשיר פשוט זריקה יתוש וכיצד להכין ולהזריק dsRNA לתוך בית החזה של יתושים על מציאה RNAi בתיווך גנים. הפגנה 2 מתארת כיצד לזהותוהפרשה שיעורי יתושים באמצעות המבדק ב vivo.
פרוטוקול RNAi משמש פותחה במעבדה של אלכסנדר Raikhel באוניברסיטת קליפורניה בריברסייד 6,7, והוא דומה הפרוטוקול שפורסם על ידי Garver ו Dimopoulos 4. הגישה הניסיונית המוצגת פרוטוקול הווידאו הזאת יכולה לשמש כדי לחקור גנים המעורבים diuresis חרק בסביבה vivo. איברי ההפרשה של חרק?…
The authors have nothing to disclose.
המחברים מודים ויקטוריה קרפנטר להערות ביקורתיות שלה של פרוטוקול זה.
Name of reagent or equipment | Company | Catalogue number | Comments |
MEGAscript T7 High Yield Kit | Ambion, Inc. | AM1334 | |
PBS buffer | Sigma-Aldrich | P4417 | |
Plastic tubing | Local vendor | PVC | |
1 ml plastic pipette tip | VWR | 83007-376 | Blue tip |
1 ml syringe | Becton, Dickinson and Company | 309602 | |
Scissors | Local vendor | ||
Metal needle | Carolina Biologicals | 654307 | Size 5 |
Fly pad | Genesee Scientific | 789060 | |
Battery-powered aspirator w/ collection vial | UPMA Labs | IPMM 2000 | |
Fine tip forceps | World Precision Instruments | 14095 | |
Glass capillary needles | World Precision Instruments | 1B200-6 | |
Stereo dissection microscope | Leica Microsystems | S6D | |
Analytical precision balance | Mettler Toledo | AB54S | |
Sucrose | Sigma-Aldrich | 84097 | |
One pint waxed lined cardboard cups | Local vendor | Manufactured soup cups | |
Mesh net | Local vendor | plastic fly gauze |