RNAi mediada por Gene y Derribo<em> En Vivo</em> Ensayo de diuresis en Mujeres Adultas<em> Aedes aegypti</em> Los mosquitos
Summary
En este protocolo se combinan RNAi mediada por silenciamiento de los genes con un<em> En vivo</em> Ensayo para estudiar la diuresis desmontables efectos de los genes de interés tiene sobre la excreción de fluido de mosquitos.
Abstract
Este protocolo vídeo muestra una técnica efectiva para derribar a un determinado gen en un insecto y llevar a cabo un bioensayo de la novela para medir la tasa de excreción. Este método puede utilizarse para obtener una mejor comprensión del proceso de la diuresis en insectos y es especialmente útil en el estudio de la diuresis en los artrópodos se alimentan de sangre que son capaces de tomar grandes cantidades de líquido en un solo harina de sangre.
Esta caída de genes mediante RNAi en combinación con un ensayo in vivo la diuresis fue desarrollado por el laboratorio de Hansen para estudiar los efectos de RNAi mediada desmontables de genes acuaporina en Aedes aegypti, mosquito diuresis 1.
El protocolo está configurado en dos partes: la primera demostración ilustra cómo construir un dispositivo simple inyección de mosquitos y cómo preparar e inyectar dsRNA en el tórax de los mosquitos para la caída de genes mediante RNAi. La segunda demostración ilustra cómo determinarlas tasas de excreción de los mosquitos utilizando un bioensayo in vivo.
Protocol
Discussion
El protocolo utilizado ARNi se ha desarrollado en el laboratorio de Alexander Raikhel en la Universidad de California Riverside 6,7 y es similar a un protocolo publicado por Garver y Dimopoulos 4. El método experimental se muestra en este protocolo de vídeo puede ser utilizado para estudiar los genes implicados en la diuresis de insectos en un entorno en vivo. Los órganos excretores de los insectos, los tubos de Malpighi, han atraído el interés de las generaciones de investigadores co…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores agradecen a Victoria Carpintero por sus comentarios críticos de este protocolo.
Materials
| Name of reagent or equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| MEGAscript T7 High Yield Kit | Ambion, Inc. | AM1334 | |
| PBS buffer | Sigma-Aldrich | P4417 | |
| Plastic tubing | Local vendor | PVC | |
| 1 ml plastic pipette tip | VWR | 83007-376 | Blue tip |
| 1 ml syringe | Becton, Dickinson and Company | 309602 | |
| Scissors | Local vendor | ||
| Metal needle | Carolina Biologicals | 654307 | Size 5 |
| Fly pad | Genesee Scientific | 789060 | |
| Battery-powered aspirator w/ collection vial | UPMA Labs | IPMM 2000 | |
| Fine tip forceps | World Precision Instruments | 14095 | |
| Glass capillary needles | World Precision Instruments | 1B200-6 | |
| Stereo dissection microscope | Leica Microsystems | S6D | |
| Analytical precision balance | Mettler Toledo | AB54S | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | 84097 | |
| One pint waxed lined cardboard cups | Local vendor | Manufactured soup cups | |
| Mesh net | Local vendor | plastic fly gauze |
Riferimenti
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