末梢感觉神经纤维亚型的免疫细胞化学鉴定(和蛋白表达其中的检测)底层外围感觉的分子机制的理解是关键。在这里,我们描述外设/内脏组织样本,特定的免疫外周感觉神经纤维,如皮肤和四肢骨骼的制备方法。
检测和外周感觉神经纤维的物理,化学和热感官刺激的初级加工的关键是在动物和人类的感官知觉。这些外设的感觉神经纤维表达过多的受体和离子通道蛋白的检测,并启动具体的感官刺激。方法可用来描述末梢感觉神经支配的皮肤纤维,它也可以用来识别特定的离子通道蛋白在这些纤维的功能表达的电气性能。然而,类似的电生理方法是不可用的(和支配其他内脏器官,包括最具挑战性的组织,如骨的外周感觉神经纤维受体和离子通道蛋白的功能表达的检测也难以发展)。此外,这种电生理方法不能被用来确定非兴奋性蛋白的表达S的外周感觉神经纤维。因此,周边感觉神经fivers /内脏组织样本的免疫提供尽可能最好的方式,以确定这些神经纤维的利益的特定蛋白质的表达。到目前为止,大多数在感觉神经元蛋白表达的研究利用免疫程序在感觉神经节,其中的信息是有限的特定类型或感觉神经元亚群的细胞体在特定的蛋白质表达。在这里,我们报告的编制外周感觉神经纤维免疫外设/内脏组织样本的详细方法/协议。我们编制的皮肤或足底打孔活检和骨(股骨)从小鼠免疫外周感觉神经纤维的部分具体细节方法。这些方法不仅末梢感觉神经元蛋白表达的定性测定的关键,但也提供了定量分析方法确定特定类型或亚群的感觉纤维蛋白表达水平的变化,以及确定在感觉神经纤维的数量和密度在各种病理状态的形态和/或解剖变化。此外,这些方法并不局限于只感觉神经纤维的染色,但也可以使用任何类型的神经纤维染色的皮肤,骨骼和其他内脏。
在这里,我们有详细的老鼠的皮肤和外周感觉神经纤维的免疫组化和检测骨组织切片的制备方法。从足底打孔活检产生的部分包含皮肤光洁,毛,这意味着可用于任何皮肤类型的协议。这些技术也可以在这些组织染色的其他类型的细胞(如白细胞,血管内皮细胞,平滑肌等等)。这些方法提供之间最佳的超微结构保存很好的折衷(这是由戊二醛固定实现,但经常在表位的破坏和削弱免疫组化染色?…
The authors have nothing to disclose.
我们感谢他的帮助下,尤里M · Usachev博士/鼠标足底冲床活检免疫共聚焦显微镜成像的初步标准化;和唐娜L。哈蒙德博士为她继续在这项工作中的帮助和建设性的批评。这项工作是由从NINDS / NIH(NS069898)的赠款,并从国防部前列腺癌研究计划署(DOD – PCRP 101096)的一个想法发展到DPM的补助金