Выделение мышиные клетки легких Дендритные
Summary
Высоко очищенного препарата мышиные клетки легких дендритных описано. Особое внимание уделяется изоляции обычных дендритных подмножество клеток.
Abstract
Легкого дендритные клетки (ДК) играют фундаментальную роль в зондирование вторжения патогенов 1,2, а также в управление вызывающий иммунологическую толерантность ответы 3 в дыхательных путях. По крайней мере, три основных подмножеств клеток легких дендритных были описаны у мышей: обычные DC (CDC) 4, plasmacytoid DC (PDC) 5 и ИФН-убийца производства DC (IKDC) 6,7. Подмножество CDC является наиболее известным DC подмножество в легких 8.
Общий маркер для выявления известных DC подмножеств CD11c, типа я трансмембранного интегрина (β2), что также выражается в моноциты, макрофаги, нейтрофилы и некоторых В-клетки 9. В некоторых тканях, используя CD11c в качестве маркера для выявления мыши DC действительно, как и в селезенке, где большинство CD11c + клеток представляют собой подмножество CDC который выражает высокий уровень главного комплекса гистосовместимости II класса (MHC-II). Тем не менее, легкие более разнородной ткани, где будетстороны DC подмножества, есть большой процент различных популяции клеток, что выражается высоким уровнем CD11c бой низкого уровня MHC-II. Опираясь на свои характеристики и в основном на его выражение F4/80, селезенки маркер макрофагов, CD11c привет MHC-II вот легкого населения была определена в качестве легочных макрофагов 10 и совсем недавно, в качестве потенциального предшественника DC 11.
В отличие от мыши PDC, изучение специфической роли CDC в легочной иммунный ответ был ограничен из-за отсутствия специфического маркера, который может помочь в изоляции этих клеток. Таким образом, в этой работе мы описываем процедуру, чтобы изолировать высокой степени очистки мыши легких CDC. Изоляция легочных подмножества DC представляет собой весьма полезный инструмент, чтобы получить представление о функции этих клеток в ответ на возбудителей инфекций дыхательных путей, а также экологические факторы, которые могут вызвать иммунный ответ в легких.
Protocol
Discussion
Выделение легочных мыши DC является важным методом для изучения широкого спектра дыхательных стимулов. Процесс получения этих клеток включает в себя важные шаги, которые препятствуют потере клеток, а также жизнеспособности клеток и чистоты. Перфузии легкого до сбора поможет устранить…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы поблагодарить Мэрилин Дитрих в цитометрии ЛГУ фонда основной поток за помощь в сортировке клеток и Питер Моттрам за его помощь в микрофотографии. Эта работа финансировалась бортпроводника Института медицинских исследований, LSU-Конкурентная исследовательской программы Award, и NIH / NIAID Гранты P20 RR020159 и R03AI081171.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACK lysing buffer | Invitrogen | D6-0005DG | |
| Anti-mouse CD11c (HL3) | BD Pharmingen | 5580979 | PE-Cy7 conjugated |
| Anti-mouse I-A/I-E (269) | BD-Pharmingen | 553623 | FITC conjugated |
| Collangenase Type 1A | Sigma | 9891-500MG | |
| Cell strainers | BD Falcon | 352340, 352360 | |
| CD11c (N418) Microbeads | Miltenyi | 130-052-001 | |
| DNase I | Sigma | D5025-150KU | |
| Hank’s Balanced Salt solution | Invitrogen | 14170 | |
| Hepes buffer solution | Invitrogen | 15630 | |
| Petri dishes 60 mm | BD Falcon | 351016 | |
| GentleMACS™ C tubes | Miltenyi | 130-093-237 | |
| Gentle MACS dissociator | Miltentyi | 130-093-235 | |
| AutoMACS-Pro™ | Miltenyi | 130-092-545 | |
| FASCS Aria | BD |
Riferimenti
- Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. Sensing pathogens and tuning immune responses. Science. 293, 253-256 (2001).
- Banchereau, J. Immunobiology of dendritic cells. Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).
- Manicassamy, S., Pulendran, B. Dendritic cell control of tolerogenic responses. Immunol. Rev. 241, 206-227 (2011).
- Steinman, R. M., Cohn, Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution. J. Exp. Med. 137, 1142-1162 (1973).
- Asselin-Paturel, C. Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology. Nat. Immunol. 2, 1144-1150 (2001).
- Chan, C. W. Interferon-producing killer dendritic cells provide a link between innate and adaptive immunity. Nat. Med. 12, 207-213 (2006).
- Taieb, J. A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance. Nat. Med. 12, 214-219 (2006).
- Guerrero-Plata, A., Kolli, D., Hong, C., Casola, A., Garofalo, R. P. Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections. Journal of Immunology. 182, 3072-3083 (2009).
- Larson, R. S., Springer, T. A. Structure and function of leukocyte integrins. Immunol. Rev. 114, 181-217 (1990).
- Sung, S. S. A major lung CD103 (alphaE)-beta7 integrin-positive epithelial dendritic cell population expressing Langerin and tight junction proteins. J. Immunol. 176, 2161-2172 (2006).
- Wang, H. Local CD11c+ MHC class II- precursors generate lung dendritic cells during respiratory viral infection, but are depleted in the process. J. Immunol. 177, 2536-2542 (2006).
- Bhatia, S. Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype. PLoS One. 6, e15943-e15943 (2011).
- Shao, Z., Makinde, T. O., McGee, H. S., Wang, X., Agrawal, D. K. Fms-like tyrosine kinase 3 ligand regulates migratory pattern and antigen uptake of lung dendritic cell subsets in a murine model of allergic airway inflammation. J. Immunol. 183, 7531-75381 (2009).
- Hao, X., Kim, T. S., Braciale, T. J. Differential response of respiratory dendritic cell subsets to influenza virus infection. J. Virol. 82, 4908-4919 (2008).
