Chromosomics：同時に新規OctoChrome FISHアッセイを使用した全24ヒト染色体における数値と構造変化の検出
Summary
新規蛍光<em>その場で</em同時に、特に数値と染色体構造の変化、白血病とリンパ腫に関連付けられた特定の染色体転座の両方を調べて>ハイブリダイゼーション（FISH）法は、一つのハイブリダイゼーションの単一のデバイス上のすべての24のヒト染色体のうち、記載されています。
Abstract
蛍光 in situハイブリダイゼーション （FISH）は細胞核1に中期または間期の染色体上に検出される特定のDNA配列を可能にする技術です。技術は、全体の染色体または特定の染色体領域にハイブリダイズするユニークな配列を有するDNAプローブを使用しており、古典的な細胞遺伝学への強力な補助としての役割を果たします。例えば、多くの以前の研究は、古典的な細胞遺伝学的分析2を使用して 、ベンゼン暴露、ベンゼン中毒の患者、およびベンゼンにさらされる労働者の健康との関連性白血病患者で増加した染色体異常を頻繁に検出を報告した。 FISHを用いて、白血病に特異的な染色体の変化は、ベンゼン誘発性白血病におけるcytogentic変化の重要な役割を示し、ベンゼン3月6日にさらされ、明らかに健康な労働者で上昇することが観察されている。
一般に、単一のFISHアッセイは、1つまたは少数の全体の染色体検査またはスライドごとに特定の遺伝子ので、複数のハイブリダイゼーションは、ヒト染色体のすべてをカバーするために複数のスライドに実施する必要があります。スペクトル核型分析（SKY）は、同時に全ゲノムの可視化が、特別なソフトウェアや機器の制限とその応用7の要件を可能にします。ここでは、新たなFISHアッセイ、我々はこのような染色体全体の異数性試験などの人間研究では、1つのスライド全24ヒト染色体の同時分析（CWAS）としてここで定義Chromosomicsに適用することができるOctoChrome-FISHを、記述し8。 ChromoprobeのマルチプローブシステムとしてCytocellにより市販されている方法の基礎は、3つの異なる全染色体ペイントプローブ（図1）を運び、それぞれが8マスに分割され、OctoChromeデバイスです。 3つのプローブの各々は、直接に異なる色の蛍光体、緑色（FITC）、赤（テキサスレッド）、青（クマリン）が付いています。 OctoChrom上で染色体の組み合わせの配置は、t（15; 17）は、t（8; 21;電子デバイスは、インスタンスt（22 9）は、最も一般的な白血病およびリンパ腫に見られる非ランダム染色体構造変化（転座）の識別を容易にするために設計されています）は、t（14; 18）9。また、染色体の数値の変化（異数性）を同時に検出することができます。対応するテンプレートのスライドは、中期スプレッドがバインドされているその上に8マス（図2）に分割され、OctoChromeデバイス上に配置されています。プローブとターゲットDNAは高温多湿のチャンバー内でハイブリダイズした時に変性し、全24ヒト染色体を同時に可視化することができる。
OctoChrome FISHは、白血病とリンパ腫の臨床診断のために、全ての染色体の異数性を検出するための有望な技術です。我々は、ベンゼンにさらされた中国人労働者のCWAS研究8,10のこの新しい染色体のアプローチを適用している。
Protocol
Discussion
この小説OctoChrome-FISHアッセイは1つが同時に複数のスライド上の単一のハイブリダイゼーションに全24ヒト染色体を調べることができます。 8マスに染色体の組み合わせの配置は、最も一般的な白血病およびリンパ腫の非ランダムな染色体再配列の識別を容易にするために設計されています。したがって、このアッセイは、同時に数値（異数性）だけでなく、構造（転座）染色体の変化を検出?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、批判的に読み、原稿を編集するための博士Cliona M.マクヘイルに感謝します。この作品は、環境健康科学研究所、Lチャンに健康補助金R01ES017452の国立研究所によって資金を供給された。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| OctoChrome Kit | Cytocell Ltd, Cambridge, UK | PMP 803 | |
| phytohaemagglutinin (PHA) | Invitrogen Corporation | 10576-015 | |
| Colcemid | Invitrogen Corporation | 15212-012 | |
| Carnoy’s fixative | Methanol : glacial acetic acid = 3: 1 | ||
| Fluorescence microscope | Equipped with filters to view DAPI, Texas Red, FITC, and Coumarin spectra individually and a DAPI/FITC/Texas Red triple filter to view different colors simultaneously | ||
| Metafer software | MetaSystems, Altlussheim, Germany | Facilitate to locate all metaphases and to re-evaluate the abnormalities |
Riferimenti
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