अलगाव और जन्म के पूर्व चूहे से hippocampal न्यूरॉन्स की संस्कृति
Summary
हम अत्यधिक एक फीडर glial सेल परत के उपयोग के बिना शुद्ध जन्म के पूर्व का माउस दिमाग से hippocampal न्यूरॉन्स की संस्कृति के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं.
Abstract
चूहा और murine hippocampal न्यूरॉन्स के प्राथमिक संस्कृतियों का व्यापक रूप से तंत्रिका जीव विज्ञान में सेलुलर तंत्र प्रकट करने के लिए उपयोग किया जाता है. अलग और बढ़ व्यक्तिगत न्यूरॉन्स द्वारा, शोधकर्ताओं सेलुलर तस्करी, सेलुलर संरचना और व्यक्ति प्रोटीन की जैव रासायनिक तकनीकों का एक किस्म का उपयोग स्थानीयकरण से संबंधित गुणों का विश्लेषण कर रहे हैं. ऐसे प्रयोगों के परिणाम से याददाश्त और सीखने के तंत्रिका आधार संबोधित सिद्धांतों के परीक्षण के लिए महत्वपूर्ण हैं. हालांकि, प्रयोगों के इन रूपों से स्पष्ट परिणाम के लिए अन्य मस्तिष्क कोशिका प्रकार के द्वारा न्यूनतम संदूषण के साथ neuronal संस्कृतियों को विकसित करने की क्षमता पर predicated हैं. इस प्रोटोकॉल में, हम विशिष्ट न्यूरॉन और hippocampal ऊतक भ्रूण सावधान विच्छेदन के विकास के लिए डिजाइन के लिए स्वस्थ न्यूरॉन्स के विकास का अनुकूलन जबकि contaminating के सेल प्रकार (यानी astrocytes) कम से कम मीडिया का उपयोग करें. भ्रूण माउस hippocampal ऊतक समान कृंतक di के लिए नमूने के आकार के कारण के ऊतकों की तुलना में अलग करने के लिए मुश्किल हो सकता हैssection. हम भ्रूण 19 दिन (E19) माउस पिल्ले से हिप्पोकैम्पस की विस्तृत विच्छेदन तकनीक बताते हैं. एक बार hippocampal ऊतक अलग है, neuronal कोशिकाओं के कोमल हदबंदी trypsin और यांत्रिक विघटन संयोजी ऊतक से अलग कोशिकाओं के लिए डिज़ाइन की एक कमजोर एकाग्रता के साथ हासिल की है जबकि कम से कम व्यक्ति की कोशिकाओं को नुकसान प्रदान. Pipettes कैसे तैयार करने के विघटन में इस्तेमाल किया जा के एक विस्तृत विवरण शामिल है. इष्टतम चढ़ाना घनत्व इम्युनो – प्रतिदीप्ति सफल सेल संस्कृति को अधिकतम करने के प्रोटोकॉल के लिए प्रदान की जाती हैं. प्रोटोकॉल माउस hippocampal ऊतक से neuronal कोशिकाओं की संस्कृति के लिए एक (लगभग 2 घंटा) तेजी से और कुशल तकनीक प्रदान करता है.
Protocol
Discussion
Hippocampal संस्कृतियों 20 से अधिक वर्षों के लिए किया गया है आण्विक जीव विज्ञान में प्रयोग किया जाता है. सिद्धांत रूप में है, जबकि, neuronal संस्कृतियों के मस्तिष्क के किसी भी हिस्से से किया जा सकता है, hippocampal संस्कृतिय?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम पांडुलिपि तैयार करने में उसकी मदद के लिए धन्यवाद डॉ. माइकल Wooten. इस काम में एनआईएच 2RO1NS033661 (MWW) द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Name of Reagent | Vendor | Catalog Number |
| Rat Tail Collagen 1 | BD Biosciences | 354236 |
| Poly-D-lysine Solution | Chemicon | A-003-E |
| Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14175-095 |
| Trypsin Solution (1X) 0.25%, liquid | Invitrogen | 15050-065 |
| NeuroBasal Medium (1X) liquid | Invitrogen | 21103-049 |
| B27 Supplement (50X) liquid | Invitrogen | 17504-044 |
| L-Glutamine 200 mM (100X) liquid | Invitrogen | 25030-149 |
| Penicillin (10,000 units/ml) / Streptomycin (10,000 μg/ml) | Invitrogen | 15140-148 |
| HI-Donor Horse Serum | Atlanta Biologicals | S12150H |
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