تحريض الطعم ضد المضيف المرض و<em> في الجسم الحي</em> مراقبة الخلايا T باستخدام نموذج MHC المطابقة الفئران
Summary
الفئران زرع نخاع العظام هو أسلوب يستخدم على نطاق واسع لدراسة آليات المناعية التي تحكم الطعم ضد المضيف المرض لدى البشر. القدرة على رصد أنماط الاتجار خلية T<em> في الجسم الحي</em> يسمح لتحليل مفصل للوضع وإدامة استجابات الخلايا T خلال الطعم ضد المضيف المرض.
Abstract
الطعم ضد المضيف المرض (GVHD) هو الحد الحاجز لاستخدام واسعة من زرع نخاع العظم كعلاج العلاجية لمجموعة متنوعة من أوجه القصور الدم. ويتسبب GVHD بواسطة الخلايا T الناضجة alloreactive موجودة في العظام الكسب غير المشروع نخاع التي غرست في المتلقي وتسبب تلفا للأعضاء المضيف. ومع ذلك، في الفئران، يجب إضافة خلايا T حتى العظم نخاع أن يسبب اللقاح GVHD. على الرغم من القيام بأعمال مكثفة لوصف T اضافة رد زرع الخلايا، bioluminescent تكنولوجيا التصوير هو وسيلة غير عدوانية لرصد أنماط الاتجار T خلية في الجسم الحي.
بعد التشعيع قاتلة، تزرع الفئران المتلقية مع خلايا نخاع العظام وsplenocytes الفئران من الجهات المانحة. يتم تضمين مجموعات فرعية من الخلايا T L2G85.B6 (الفئران المعدلة وراثيا التي تعبر عن وسيفيراز جوهري) في عملية الزرع. عن طريق زرع الخلايا مجموعات فرعية معينة فقط T، واحد قادر على تتبع مجموعات فرعية محددة الخلايا T في الجسم الحي،واستنادا إلى موقعها وتطوير الفرضيات فيما يتعلق بدور مجموعات فرعية محددة الخلايا T في تعزيز GVHD في نقاط زمنية مختلفة. في فترات محددة سلفا زرع آخر، وتصوير الفئران المتلقية باستخدام كاميرا CCD Xenogen IVIS. يمكن كميا شدة الضوء باستخدام برنامج السكن لتوليد صورة صورة زائفة الألوان يعتمد على كثافة الفوتون (أحمر = كثافة عالية، البنفسجي = منخفض الكثافة).
بين 4-7 أيام آخر زرع والفئران المتلقية تبدأ تظهر علامات سريرية للGVHD. وضعت كوك وآخرون. 1 (أ) لنظام التسجيل quantitate تطور المرض استنادا إلى الفراء نسيج المتلقي الفئران وسلامة الجلد، والنشاط، وفقدان الوزن، والموقف. وسجل الفئران يوميا، والموت الرحيم عندما تصبح المحتضرة. الفئران المتلقية أصبحت تحتضر عموما 20-30 زرع آخر أيام.
نماذج الفئران هي أدوات قيمة لدراسة علم المناعة من GVHD. زرع الخلايا بشكل انتقائي خاص T مجموعات فرعية آلأدنى مستوى لتحديد دقيق لأدوار كل مجموعة فرعية يلعب. غير جراحية تتبع استجابات الخلايا T في الجسم الحي يضيف طبقة أخرى ذات قيمة للنماذج GVHD الفئران.
Protocol
Discussion
بروتوكول لإحداث GVHD في الفئران المقدمة هنا يمثل نموذجا ذات الصلة سريريا من GVHD الفئران. أنشئت أصلا من قبل بيرغر وآخرون في عام 1994، وC57BL / 6 إلى مزيج سلالة BALB.B هو MHC-المتطابقة، مع معدل وفيات GVHD بوساطة CD4 التابعة، CD8 T المستجيبات 2، تتشابه بشكل كبير مع السيناريو السر…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
اننا مدينون لGaughan أليس وانغ جينغ جياو-المعلقة التي الدعم التقني والمدخلات الفكرية، والدعم المعنوي كان لهم دور فعال في تحريك هذه الدراسات في المستقبل. وقدم الدعم لهذه الدراسات من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح AI036532 لجاه.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
Riferimenti
- Cooke, K. R. An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin. Blood. 88, 3230-3239 (1996).
- Berger, M. T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens. Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).
- Nimer, S. D. Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial. Transplantation. 57, 82-87 (1994).
- Korngold, R., Sprent, J. Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences. Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).
- Cao, Y. A. Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation. Transplantation. 80, 134-139 (2005).
- Asady, R. E. l. TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease. J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).
- Larson, R. S., Springer, T. A. Structure and function of leukocyte integrins. Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).
- Karecla, P. I. Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7). Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).
- Cepek, K. L. Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin. Nature. 372, 190-193 (1994).
- Malarkannan, S. The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60. J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).
