Induktion af graft-versus-host sygdom og<em> In Vivo</em> T Cell Monitoring Brug en MHC-matchet murin model
Summary
Murin knoglemarvstransplantation er en meget anvendt teknik til at undersøge immunologiske mekanismer for transplantat-versus-host-sygdom hos mennesker. Muligheden for at overvåge T-celle trafficking mønstre<em> In vivo</em> Giver mulighed for detaljeret analyse af udviklingen og bevarelsen af T-celle responser under graft-versus-host sygdom.
Abstract
Graft-versus-vært sygdom (GVHD) er den begrænsende barriere for en bred anvendelse af knoglemarvstransplantation som en kurativ terapi for en række hæmatologiske mangler. GVHD er forårsaget af modne alloreaktive T-celler til stede i knoglemarven graft, der infunderes i modtageren og beskadige vært organer. Men i mus, skal T-celler sættes til knoglemarven inoculum at forårsage GVHD. Selv om omfattende arbejde er blevet udført for at karakterisere T-celle responser efter transplantation, bioluminescerende billedteknologi er en ikke-invasiv fremgangsmåde til overvågning af T-celle trafficking mønstre in vivo.
Efter letal bestråling, er recipientmus transplanteret med knoglemarvsceller og splenocytter fra donormus. T-celledelmængder fra L2G85.B6 (transgene mus, der konstitutivt udtrykker luciferase) er inkluderet i transplantatet. Ved kun at transplantere visse T-celledelmængder er man i stand til at spore specifikke T-celledelmængder in vivo,og ud fra det sted, udvikler hypoteser om betydningen af specifikke T-celledelmængder at fremme GVHD på forskellige tidspunkter. Ved forudbestemte intervaller efter transplantation, der recipientmus filmede med en Xenogen IVIS CCD kamera. Lysintensiteten kan kvantificeres ved hjælp af Living Billede software til at generere et pseudo-farvebillede baseret på foton intensitet (rød = høj intensitet, violet = lav intensitet).
Mellem 4-7 dage efter transplantationen, begynder recipientmus at vise kliniske tegn på GVHD. Cooke et al. En udviklet et scoringssystem til kvantificering af sygdomsprogression baseret på recipientmus pels tekstur, hudens integritet, aktivitet, vægttab, og kropsholdning. Mus er scoret dagligt, og aflivet når de bliver døende. Recipientmus generelt blevet døende 20-30 dage efter transplantationen.
Murine modeller er værdifulde værktøjer for at studere immunologi GVHD. Selektivt transplantere især T-celle delmængder alnedture til omhyggelig identifikation af de roller hver delmængde spiller. Ikke-invasiv sporing T-cellereaktioner in vivo tilføjer endnu et lag af værdi for murine GVHD model.
Protocol
Discussion
Protokollen til induktion GVHD i mus præsenteret her repræsenterer en klinisk relevant model af murin GVHD. Oprindeligt oprettet af Berger et al. I 1994, er det C57BL / 6 i BALB.B stamme kombination MHC-matchet, med GVHD dødelighed medieret af CD4 afhængige, CD8 T effektorer 2, meget ligner den mest almindelige kliniske scenarie 3. Det er kendt, at transplantation af CD8 T-celler alene ikke forårsager GVHD i denne model, men sygdomsprogression er betydeligt værre, når både CD4-og C…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi står i gæld til Alice Gaughan og Jiao-Jing Wang hvis fremragende teknisk support, intellektuelle input, og moralsk støtte var medvirkende til at flytte disse undersøgelser frem. Disse undersøgelser blev støttet af NIH tilskud AI036532 til Gah.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
Riferimenti
- Cooke, K. R. An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin. Blood. 88, 3230-3239 (1996).
- Berger, M. T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens. Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).
- Nimer, S. D. Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial. Transplantation. 57, 82-87 (1994).
- Korngold, R., Sprent, J. Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences. Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).
- Cao, Y. A. Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation. Transplantation. 80, 134-139 (2005).
- Asady, R. E. l. TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease. J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).
- Larson, R. S., Springer, T. A. Structure and function of leukocyte integrins. Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).
- Karecla, P. I. Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7). Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).
- Cepek, K. L. Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin. Nature. 372, 190-193 (1994).
- Malarkannan, S. The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60. J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).
