移植片対宿主病の誘導および<emインビボで></emMHCマッチしたマウスモデルを使用する> T細胞のモニタリング
Summary
マウス骨髄移植は、ヒトにおいて、移植片対宿主病を支配する免疫のメカニズムを研究するために広く使われているテクニックです。 T細胞の人身売買パターンを監視する機能<em生体内で></em>移植片対宿主病の間にT細胞応答の開発や永続化の詳細な分析が可能になります。
Abstract
移植片対宿主病（GVHD）は、血液学的欠陥の様々な根治療法として骨髄移植の広範な使用に制限する障壁となっている。 GVHDはレシピエントに注入された骨髄移植に存在する成熟したアロ反応性T細胞によって引き起こされるとホストの臓器に損傷を与えるされています。しかし、マウスでは、T細胞がGVHDを引き起こすために骨髄接種に追加する必要があります。大規模な作業は、T細胞応答の移植後を特徴づけるために行われているが、生物発光イメージング技術は、生体内で T細胞の人身売買パターンを監視する非侵襲的方法である。
致死照射後、レシピエントマウスをドナーマウスから骨髄細胞と脾細胞を移植されています。 L2G85.B6（恒常的にルシフェラーゼを発現するトランスジェニックマウス）由来のT細胞サブセットは、移植に含まれています。のみ特定のT細胞サブセットを移植することによって、人は、 生体内で特異的なT細胞サブセットを追跡することができますとその場所に基づいて、様々な時点でGVHDの促進に特異的なT細胞サブセットの役割に関する仮説を開発しています。所定の間隔の移植後に、レシピエントマウスXenogen IVIS CCDカメラを用いて結像される。光強度は光子強度（赤=高強度、紫=低強度）に基づいて擬似カラー画像を生成するためにリビングImageソフトウェアを用いて定量化することができる。
4-7日後、移植の間、レシピエントマウスはGVHDの臨床徴候を示し始める。クックら 1は、レシピエントマウスの毛皮の質感、皮膚の完全性、活動、体重減少、及び姿勢に基づいて、病気の進行を定量するためのスコアリングシステムを開発しました。マウスは毎日の得点、そして、彼らは瀕死状態になったときに安楽死させる。レシピエントマウスは、一般的に20〜30日、移植後瀕死になる。
マウスモデルでは、GVHDの免疫学を研究するための貴重なツールです。選択的に移植特定のT細胞サブセットら各サブセットが果たす役割を慎重に識別のための安値。非侵襲的に生体内で T細胞応答を追跡すると、マウスGVHDモデルに付加価値の別の層を追加します。
Protocol
Discussion
ここに提示されたマウスでGVHDを誘導するためのプロトコルがマウスGVHDの臨床的に関連のあるモデルを表します。もともとBerger らによって確立された1994年に、C57BL / 6はBALB.Bひずみ組み合わせに、MHC-照合され、依存CD4、最も一般的な臨床シナリオ3と非常に類似してCD8 + Tエフェクタ2によって媒介移植片対宿主病（GVHD）で死亡。それは単独でCD8 + T細胞を移植する?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、その優れた技術サポート、知的入力、および精神的支援先にこれらの研究を動かすことに尽力していたアリスゴーハンとジャオ·チン王の世話になっています。これらの研究は、GAHにNIHの助成金AI036532によってサポートされていました。
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
Riferimenti
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