이식 - 대 - 호스트 질병의 유도 및<em> 생체 내</emMHC 검색 손쥐 모델을 사용> T 셀 모니터링
Summary
손쥐 골수 이식은 인간에 이식 – 대 – 호스트 질병에 관한 면역 메커니즘을 연구 할 수있는 널리 사용되는 기술이다. T 세포 거래 패턴을 모니터링 할 수있는 능력<em> 생체 내</em> 이식 – 대 – 호스트 질병 중 T 세포 응답의 개발 및 영구화에 대한 자세한 분석을 할 수 있습니다.
Abstract
그라프 트 – 대 – 호스트 질환 (GVHD)는 hematological 결함의 다양한 치료 요법으로 골수 이식의 광범위한 사용에 제한 장벽입니다. GVHD는받는 사람에 주입하는 골수 이식에 존재하는 성숙 alloreactive T 세포에 의한와 호스트 장기에 손상을 일으킬 수 있습니다. 그러나 마우스에서 T 세포는 GVHD 원인 골수 inoculum에 추가해야합니다. 광범위한 작업은 T 세포 응답 포스트 이식을 특성화하기 위해 수행되었지만, 발광 생물 이미징 기술은 생체에서 T 세포 거래 패턴을 모니터링 할 수있는 비 침습적 방법입니다.
치명적인 조사 후,받는 사람 쥐들이 기증 마우스의 골수 세포와 splenocytes으로 이식되어 있습니다. L2G85.B6 (constitutively 루시 페라 제 표현 형질 전환 생쥐)에서 T 세포의 하위 집합은 이식에 포함되어 있습니다. 특정 T 세포 하위 집합을 이식함으로써, 하나는 생체에서 특정 T 세포 하위 집합을 추적 할 수 있습니다과 위치에 따라 다양한 시간 지점에서 GVHD 홍보에서 특정 T 세포 하위 집합의 역할에 관한 가설을 개발합니다. 미리 결정된 간격 게시물 이식에서받는 마우스는 Xenogen IVIS CCD 카메라를 사용하여 이미징 있습니다. 빛의 세기가 광자 강도 (빨간색 = 높은 강도, 보라색 = 낮은 강도)을 기반으로 한 의사 컬러 이미지를 생성하는 생활 이미지 소프트웨어를 사용하여 정량화 할 수 있습니다.
4-7일 게시물 이식 사이에받는 마우스는 GVHD의 임상 징후를 보여 시작합니다. 쿡 외. 1받는 사람 쥐 모피 텍스처, 피부 무결성, 활동, 체중 감소 및 자세에 따라 질병의 진행을 quantitate 할 수있는 점수 시스템을 개발했습니다. 마우스는 매일 채점, 그리고 그들이 죽어가는이 될 때 euthanized 있습니다. 받는 마우스는 일반적으로 20-30일 게시물 이식 죽어가는이됩니다.
손쥐 모델은 GVHD의 면역학을 공부를위한 유용한 도구입니다. 선택적으로 특정 T 세포 하위 집합 알을 이식각 하위 집합이 재생 역할에주의 식별 낮은. 비 invasively 생체에서 T 세포 응답을 추적하는 것은 손쥐 GVHD 모델에 가치의 또 다른 레이어를 추가합니다.
Protocol
Discussion
여기에 제시된 마우스에 GVHD 유도를위한 프로토콜은 손쥐 GVHD의 임상 관련 모델을 나타냅니다. 원래 버거 외에 의해 설립. 1994 년 BALB.B 변형 조합에 C57Bl / 6 의존 CD4, 가장 일반적인 임상 시나리오 3 매우 유사한 CD8 T의 effectors 2에 의해 중재 GVHD 사망률과 MHC-일치합니다.이 그것은 혼자 CD8 T 세포를 이식하면이 모델 GVHD 발생하지 않습니다 알려져 있지만, 질병의 진행은 ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 그의 뛰어난 기술 지원, 지적 입력 및 정신적 지원 앞서 연구를 이동하는 역할을했다 앨리스 고간과 자오 – 징 왕에게 빚을 졌네. 이러한 연구 GAH에 NIH 보조금 AI036532에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
Riferimenti
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