في الوقت الحقيقي رصد يجند مستقبلات التفاعل مع الإسفار نقل الطاقة الرنين
Summary
علينا أن نبرهن الحنق بين polydiacetylene البوليمر مترافق (PDA) وتعلق fluorophore إلى سطح الليبوزومات PDA للاستشعار من الجزيئات الحيوية. الليبوزومات PDA الواردة أيضا جزيئات مستقبلات على سطحها لالجزيئات الحيوية لاستخدامها تحقيقات. يجند مستقبلات التفاعلات تؤدي إلى تغييرات في كفاءة الحنق بين fluorophore وPDA التي هي أساس لآلية الاستشعار عن بعد.
Abstract
الحنق هو العملية التي يتم بواسطتها الطاقة الإشعاعية غير المنقولة من جزيء المانحة متحمس لجزيء متقبل الأرض التابعة للدولة من خلال التفاعلات ثنائي القطب ثنائي القطب، طويلة المدى 1. في مقايسة الحاضر الاستشعار عن بعد، ونحن الاستفادة من العقار المميز من PDA: الأزرق تحول في الطيف للأشعة فوق البنفسجية فيس امتصاص الإلكترونية PDA (الشكل 1) بعد تحليلها يتفاعل مع المستقبلات المرتبطة PDA 2،3،4،7. هذا التحول في امتصاص الطيف PDA ويوفر التغييرات في التداخل الطيفي (J) بين PDA (متقبل) ورودامين (المانحين) الذي يؤدي إلى تغييرات في كفاءة الحنق. وهكذا، تم الكشف عن التفاعلات بين الحليلة (يجند) والمستقبلات من خلال الحنق بين fluorophores المانحة وPDA. على وجه الخصوص، وتبين لنا أن الاستشعار من جزيء البروتين streptavidin نموذج. علينا أن نبرهن أيضا التساهمية ملزم للمصل الألبومين البقري (BSA) لسطح الحويصلية مع الحنق آلية. هذه التفاعلات بين رويمكن لمس انه الليبوزومات طبقة ثنائية وجزيئات البروتين في الوقت الحقيقي. الطريقة المقترحة هي طريقة عامة لاستشعار كيميائية صغيرة والجزيئات الكيميائية الحيوية الكبيرة. منذ مضان هذا بحد ذاته أكثر حساسية من قياس الألوان، ويمكن الحد من الكشف الفحص يكون في شبه nanomolar مجموعة أو أقل 8. علاوة على ذلك، PDA يمكن أن تكون بمثابة متقبل العالمية في الحنق، مما يعني أن يمكن تطوير أجهزة استشعار متعددة مع PDA (متقبل) functionalized مع الجهات المانحة ومستقبلات مختلفة تعلق على سطح الليبوزومات PDA.
Protocol
Discussion
لقد أجرينا ملزمة انتقائية من بقايا يسين من البروتين على سطح الحويصلية باستخدام NHS-أمين التفاعل. هذا الأسلوب يستند إلى الحنق قادرة على القيام في الوقت الحقيقي رصد البيوتين streptavidin-ملزمة والبروتين (BSA) ملزمة لسطح الحويصلية. ويمكن تطبيق إجراء مشابه لدراسة ديناميات ملزمة …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقدمت الدعم المالي لهذا العمل من خلال المؤسسة الوطنية للعلوم، المعهد الوطني للصحة (NIH)، مواد مركز تكنولوجيا (MTC) وORDA في SIUC. نشكر NSF للحصول على منحة (CHE-0959568) لشراء لFE-SEM. نود أن نشكر الأستاذ ماثيو لإجراء مناقشات مفيدة مكارول. سوف جوليا رييس أود أن أشكر COLCIENCIAS، وجامعة كولومبيا وكالة Pedagogica ذ Tecnologica كولومبيا دي للمنح الدراسية والدعم المالي لها.
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 10,12-pentacosadiynoic acid (PCDA) | GFS chemicals | 3261 | Light sensitive |
| N-hydroxysuccinimide (NHS) | Acros organics | 157270250 | Moisture sensitive |
| 1-(3-(dimethylamino)propyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) | Chem-impex International | 00050 | |
| 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DMPC) | Avanti Polar lipids | 850345P | |
| Rhodamine-tagged Bovine Serum Albumin (BSA-Rh) | Sigma Aldrich | A4537 | |
| (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-(biotinyl)(biotin-DOPE) | Avanti Polar lipids | 870282 |
Riferimenti
- Lakowicz, J. R. . Principles of Fluorescence Spectroscopy. , (1999).
- Charych, D. H., Nagy, J. O., Spevak, W., Bednarski, M. D. Direct Colorimetric Detection of a Receptor-Ligand Interaction by a Polymerized Bilayer Assembly. Science. 261, 585-588 (1993).
- Yoon, B., Lee, S., Kim, J. -. M. Recent Conceptual and Technological Advances in Polydiacetylene-based Supramolecular Chemosensors. Chem. Soc. Rev. 38, 1958-1968 (2009).
- Xuelian, L. i., Kohli, P. u. n. i. t. Investigating Molecular Interactions in Biosensors Based on Fluorescence Resonance Energy Transfer. J. Phys. Chem. C. 114, 6255-6264 (2010).
- Li, X., Matthews, S., Kohli, P. Fluorescence Resonance Energy Transfer in Polydiacetylene Liposomes. J. Phys. Chem. B. 112, 13263-13272 (2008).
- Li, X., McCarroll, M., Kohli, P. Modulating Fluorescence Resonance Energy Transfer in Conjugated Liposomes. Langmuir. 22, (2006).
- New, R. R. C., New, R. R. C. . Liposomes: A Practical Approach. , 33-104 (1990).
- Chen, X., Lee, J., Jou, M. J., Kim, J. -. M., Yoon, J. Colorimetric and Fluorometric Detection of Cationic Surfactants Based on Conjugated Polydiacetylene Supramolecules. Chem. Commun. , 3434-3436 (2009).
- Yarimaga, O., Im, M., Choi, Y. -. K., Kim, T. W., Jung, Y. K., Park, H. G., Lee, S., Kim, J. -. M. A Color Display System Based on Thermochromic Conjugated Polydiacetylene. Macromolecular Research. 18, 404-407 (2010).
