प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी जांच और अगली पीढ़ी के अनुक्रमण: organelle वफ़ादारी में शामिल जीनों की पहचान के लिए उपयोगी उपकरण
Summary
कोशिका जीव विज्ञान में एक मौलिक खोज के लिए तंत्र है कि organelles कि कोशिकाओं की पहचान कायम परिभाषित है. यहाँ हम एक लिए संयंत्र प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी और अगली पीढ़ी के अनुक्रमण उपकरण का उपयोग कर organelles के morphological और कार्यात्मक अखंडता के लिए जिम्मेदार जीन की पहचान विधि का प्रस्ताव.
Abstract
इस प्रोटोकॉल Arabidopsis seedlings के एक प्रतिदीप्ति खुर्दबीन आधारित स्क्रीनिंग का वर्णन करता है और बताता है कि कैसे पीछे हटने का परिवर्तन है कि एक विशिष्ट टैग स्रावी मार्ग में फ्लोरोसेंट मार्कर के subcellular वितरण में परिवर्तन नक्शा Arabidopsis इसके जीनोम आकार की वजह से एक शक्तिशाली आनुवंशिक अध्ययन के लिए जैविक मॉडल है. पीढ़ी समय, और राज्यों के बीच आणविक तंत्र के संरक्षण. एक दृष्टिकोण के रूप में पारंपरिक विधि आणविक मार्करों के आधार पर करने के लिए वैकल्पिक में उत्परिवर्तन मैप जीनोटाइपिंग सरणी फायदेमंद है क्योंकि यह अपेक्षाकृत तेजी से है और एक बहुत कम समय फ्रेम में कई म्यूटेंट के मानचित्रण अनुमति दे सकता है. इस विधि प्रोटीन की पहचान है कि पौधों में किसी भी organelle की अखंडता को प्रभावित कर सकते हैं अनुमति देता है. यहाँ एक उदाहरण के रूप में, हम नक्शा endoplasmic जालिका (ईआर) की अखंडता के लिए महत्वपूर्ण जीनों के लिए एक स्क्रीन का प्रस्ताव है. हमारा दृष्टिकोण है, तथापि, आसानी से अन्य संयंत्र सेल organelles के लिए बढ़ाया जा सकता है(उदाहरण के लिए 1,2 देखें), और इस प्रकार आणविक आधार शासी अन्य subcellular संरचनाओं को समझने की ओर एक महत्वपूर्ण कदम का प्रतिनिधित्व करता है.
Protocol
Discussion
यहाँ हम endomembrane म्यूटेंट की पहचान के लिए एक confocal माइक्रोस्कोपी आधारित स्क्रीनिंग में वर्णित है. इस दृष्टिकोण को आसानी से सेल के अन्य organelles विशिष्ट फ्लोरोसेंट प्रोटीन मार्कर जिसके लिए उपलब्ध हैं बढ़ाया जा स…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम रसायन विज्ञान, भूविज्ञान के अंतर्गत और बायोसाइंसेज प्रभाग, मूल ऊर्जा विज्ञान, विज्ञान के कार्यालय, अमेरिकी ऊर्जा विभाग (पुरस्कार संख्या डे – FG02-91ER20021) और राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (0,948,584 MCB) (अमेरिकन प्लान) के कार्यालय द्वारा समर्थन स्वीकार करते हैं. हम पांडुलिपि संपादन के सुश्री करेन बर्ड के लिए के लिए आभारी हैं.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Ethylmethane sulfonate | Sigma | M0880 |
| NaOH | J.T Baker | 3722-05 |
| Murashige skoog basal medium w gamborg vitamins | Phyto technolog laboratorie | M404 |
| Phytagel | Sigma | P8169-1Kg |
| RNeasy mini kit | Qiagen | 74104 |
| Master pure plant leaf DNA purification kit | Epicentre | MPP92100 |
| Bioprime DNA labeling system | Invitrogen | 18094-011 |
| Alcohol 200 proof | Decan laboratories inc. | 2716 |
| NaOAc | J.T Baker | |
| Gene chip Arabidopsis ATH1 genome array | Affymetrix | 900385 |
| Falcon tubes 50 mL | corning | 430290 |
| Eppendorf tubes 1.5 mL | ||
| Filter paper 90mm | Whatman | 1001090 |
| Analytical Balance | Mettler Toledo AB54-S | n.a |
| Nutating (wave) shaker | Heidolph polymax 1040 | n.a |
| Centrifuge | Eppendorf 5417-R | n.a |
Riferimenti
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