Um modelo fechado de tórax murino de isquemia do miocárdio e reperfusão
Summary
O trauma cirúrgico induz uma resposta inflamatória. As citocinas e ligandos endógenos são conhecidos para modular o tamanho do enfarte do miocárdio após isquemia e reperfusão. Apresentamos um modelo modificado fechado de tórax murino de isquemia e reperfusão utilizando pesos pendurados para minimizar os efeitos de toracotomia.
Abstract
O trauma cirúrgico, por toracotomia de tórax aberto em modelos de ligadura coronária induz uma resposta imune que modifica diferentes mecanismos envolvidos na isquemia e reperfusão. A resposta imune inclui a expressão de citocinas e de libertação ou secreção de ligandos endógenos de inatos receptores imunes. Ativação da imunidade inata pode potencialmente modular tamanho do infarto. Nós modificamos uma já existente modelo fechado de tórax murino usando pesos pendurados que podem ser úteis para o estudo do miocárdio pré-e pós eo papel da imunidade inata na isquemia miocárdica e reperfusão. Este modelo permite animais para se recuperar de trauma cirúrgico antes do início da isquemia do miocárdio.
Os anestésicos voláteis foram intensamente estudados e seu efeito de pré-condicionamento para o coração isquémico é bem conhecida. No entanto, este efeito protector impede a sua utilização em modelos de tórax aberto de ligação da artéria coronária. Assim, uma outra vantagem pode ser a utilização de thde e bem controláveis anestésicos voláteis para a instrumentação em um modelo fechado de tórax crônica, uma vez que seu efeito de pré-condicionamento dura até 72 horas. Doenças cardíacas crônicas com isquemia intermitente e modelos de vida são múltiplas outras possíveis aplicações deste modelo.
Para o modelo fechado de tórax crônica, ratos intubados e ventilados submetidos a uma toracotomia lateral brusco através do 4 º espaço intercostal. Na sequência de identificação do descendente anterior esquerda uma ligadura é passado por baixo do vaso e ambas as extremidades de sutura são enfiados através de um oclusor. Em seguida, as duas extremidades de sutura são passados através da parede torácica, em espiral para formar um laço e deixado no tecido subcutâneo. Após o encerramento peito e recuperação por 5 dias, os ratos são anestesiados novamente, a pele do peito é reaberto e pesos pendurados são conectados ao circuito sob controle de ECG.
No final do protocolo de isquemia / reperfusão, corações podem ser marcadas com TTC para enfarteavaliação do tamanho ou sofrer fixação de perfusão para permitir estudos morfométricos além de histologia e imuno-histoquímica.
Protocol
Discussion
Nós modificamos um modelo fechado de tórax murino, acessando o coração através de uma toracotomia lateral intercostal esquerdo e levando as suturas LAD no peito esquerdo na linha hemiclavicular. Saindo da caixa torácica óssea intacta irá minimizar o trauma, a necessidade de medicação para a dor, infecção de sítio cirúrgico e assim, facilitar a recuperação. Ao preservar a esquerda da artéria mamífero interna não há necessidade de electrocauterização. Deixamos o laço de sutura no tecido subcutâneo …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecemos a Daniel Duerr para o seu conselho sobre a fixação de perfusão-técnica.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Vapor | Drägerwerk AG | Isoflo |
| Microscope | Leica | M80 |
| Light source | Schott | KL 1500 LCD |
| Homeothermic Blanket Control Unit | Harvard Apparatus | |
| MiniVent Type 845 | Hugo Sachs Elektronik | |
| 8-0 Prolene | Ethicon | BV130-5 6.5mm 3/8c |
| 6-0 Prolene | Ethicon | BV-1 9.3 mm 3/8c |
| Kalt suture needle size 3 | FST | 12050-03 |
| Triphenyltetrazolium | Sigma Aldrich | 93145 |
| Phthalo blue | Heucotech LTD | |
| PowerLab | ADInstruments |
Riferimenti
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