カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（CFSE）を用いてヒト神経膠芽腫のスロー非分裂細胞の同定および単離
Summary
このビデオプロトコルは、細胞分裂の頻度に基づいて、ヒト神経膠芽腫の細胞の異なるサブ集団の同定と分離するための蛍光色素カルボキシスクシンイミジルエステル（CFSE）のアプリケーションを示しています。
Abstract
腫瘍の不均一性は、腫瘍の堅牢性を支える基本的な特徴を表しており、治療戦略1の発展に中心的な障害となる。腫瘍の不均一性の問題を克服するためには、特定の疾患の病態を推進し、臨床的に関連するターゲットを表す腫瘍集団の表現型、（エピ）の遺伝的および機能的同定および特徴付けを可能にするアッセイおよびツールを開発することが不可欠である。それは、腫瘍は細胞分裂の周波数の異なる細胞の異なる亜分画を示すこと、および低速サイクリングという機能的な基準を積極的に脳を含めたいくつかの癌における腫瘍形成能力に関連付けられていることを今では十分に確立されている乳房、皮膚、膵臓ならびに白血病2-8。蛍光色素カルボキシスクシンイミジルエステル（CFSE）は、in vitroおよび血液媒介トンを用いたin vivo での細胞の分裂頻度を追跡するために使用されてきたumorsや膠芽腫などの固形腫瘍2,7,8。 CFSEの細胞透過性の非蛍光プロドラッグは、安定したアミド結合9を形成する細胞内のアミン基とのスクシンイミジル部分との反応によってタンパク質と共有結合することにより細胞内に保持される蛍光化合物に細胞内エステラーゼによって変換されます。蛍光染料が均等にすべての細胞分裂による蛍光強度の半減につながる、部門により娘細胞の間で分配される。これは、部門10の8〜10ラウンドまでの細胞周期の周波数のトラッキングが可能です。 CFSE保持能力は、癌幹細胞活性2に濃縮されることが実証遅いサイクリング亜集団（上位5％の色素保持する細胞）を同定し、単離する脳腫瘍細胞で使用されました。
このプロトコルは、人間の文化の中でglio CFSEで細胞を染色する技術と、個々の集団の単離を記載芽腫（GBM）の由来のフローサイトメトリー2を使用して異なる分裂速度 を有する細胞。技術はCFSE標識を保持する能力によって細胞の脳腫瘍スローサイクリング人口を同定および単離するのに役立っています。
Protocol
Discussion
研究数の増加は、腫瘍形成、治療抵抗2月8日に貢献癌の細胞の遅い分割するサブコンパートメントの重要性を実証している。したがって、それは別の成長率と集団を比較するために、より一般的に細胞またはこの特定の亜集団の研究を可能にする実験方法を記述し、標準化することが重要です。細胞分裂の彼らの率に基づいて、細胞の亜分画を同定および単離するために、CFSEを使用?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は脳腫瘍研究のためのフロリダセンター、脳腫瘍治療と米国立衛生研究所（NIH）のためにプレストンA.ウェルズ·ジュニア·センター（1R21CA141020-01）によってサポートされていました。
Materials
| Name of the reagent | Tipo | Company | Catalogue number |
| NeuroCult NSC Basal Medium (Human) | Medium | Stem Cell Technologies | 05750 |
| NeuroCult NSC Proliferation Supplements (Human) | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05753 |
| %0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 |
| Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 |
| Penicillin/Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 |
| T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 |
| T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 |
| 15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 |
| 50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 |
| EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG |
| CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit | Fluorescent Cell Division Tracking Dye | Molecular Probes, Invitrogen | C34554 |
Riferimenti
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