Microfluídica endotelizado para estudiar las interacciones microvasculares en Enfermedades Hematológicas
Summary
Un método para la cultura de una monocapa de células endoteliales en toda la superficie interior en 3D de un dispositivo de microfluidos con microvascular del tamaño de los canales (<30 micras) se describe. Este<em> In vitro</em> Modelo de microvasculatura permite el estudio de las interacciones biofísicas entre las células sanguíneas, células endoteliales, y factores solubles en enfermedades hematológicas.
Abstract
Los avances en técnicas de microfabricación han permitido la producción de sistemas de microfluidos de bajo costo y reproducible para la realización de experimentos biológicos y bioquímicos en el 1,2 micro y nanoscales. Además, también se han microfluídica se utilizan específicamente para analizar cuantitativamente los procesos hematológicos y microvascular, debido a su capacidad de controlar fácilmente el entorno dinámico fluídico y condiciones biológicas 3-6. Como tal, los investigadores han utilizado más recientemente sistemas de microfluidos para estudiar la deformabilidad de las células sanguíneas, la agregación de células de sangre, el flujo sanguíneo microvascular, y la sangre endoteliales interacciones célula-célula 6-13. Sin embargo, estos sistemas de microfluidos o bien no incluyen células endoteliales cultivadas o eran más grandes que la correspondiente a la sizescale microvasculares procesos patológicos. Una plataforma de microfluidos con cultivos de células endoteliales, que recapitula la precisión celular, físico, y hemodynel medio ambiente amic de la microcirculación que se necesita para avanzar en nuestra comprensión de la fisiopatología subyacente biofísica de enfermedades hematológicas que involucran la microvasculatura.
Aquí se presenta un método para crear una "endotelizado" modelo in vitro de la microvasculatura, utilizando un proceso sencillo, solo la máscara de microfabricación en conjunción con las técnicas de cultivo de células endoteliales, para estudiar las interacciones patológicas microvasculares biofísicos que se producen en la enfermedad hematológica. Este "microvasculatura-en-un-chip" proporciona al investigador un sólido ensayo que se controla estrictamente biológica, así como las condiciones biofísicas y se maneja mediante una bomba de jeringa estándar y claro / microscopía de fluorescencia. Parámetros tales como las condiciones hemodinámicas microcirculación, el tipo de células endoteliales, el tipo de células sanguíneas (s) y la concentración (s), droga / concentración inhibitoria etc, todos pueden ser fácilmente controlado. Como tal, nuestro microsistema ofreceun método para investigar cuantitativamente los procesos de enfermedad en la que se altera el flujo microvascular, debido a alteraciones en la adhesión celular, la agregación y la deformabilidad, la capacidad disponible con los ensayos existentes.
Protocol
Discussion
Nuestro sistema microdispositivo endotelizado es el más adecuado cuando se utiliza en conjunción con los experimentos in vivo, y su enfoque reduccionista puede ayudar a aclarar los mecanismos biofísicos de los procesos hematológicos que se observan en los seres humanos y modelos animales. Además, nuestro sistema no está exento de limitaciones. Por ejemplo, nuestros canales de microfluidos son cuadrados en sección transversal. Aunque técnicamente microcanales circulares se pueden fabricar 1…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Damos las gracias a T. Hunt, M. Rosenbluth, y el Laboratorio de Lam por sus consejos y discusiones útiles. Queremos agradecer el apoyo de G. Spinner y el Instituto de Electrónica y Nanotecnología en el Instituto de Tecnología de Georgia. El apoyo financiero para este trabajo fue proporcionado por una subvención del NIH K08-HL093360, premio UCSF REAC, un Centro de Desarrollo de Nanomedicina NIH Premio PN2EY018244, y la financiación del Centro para la Biología de las células endoteliales de la Salud de los Niños de Atlanta.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| blunt point needle | OK International | 920050-TE | Precision TE needle 20 Gauge x 1/2″, pink |
| dextran | Sigma-Aldrich | 31392 | |
| Fibronectin | Sigma-Aldrich | F0895 | |
| Hole puncher (pin vise) | Technical Innovations | ||
| Human umbilical cord endothelial cells (HUVECs) | Lonza | CC-2519 | |
| Plasma cleaner | Plasma | PDC-326 | |
| Polydimethylsiloxane (PDMS) | Fisher Scientific | NC9285739 | Sylgard 184 Silicone Elastomer KIT |
| Sigmacote | Sigma-Aldrich | SL2 | |
| SU-8 2025 | Microchem | Y111069 | |
| SU-8 Developer | Microchem | Y020100 | |
| Syringe pump | Harvard Apparatus | 70-3008 | PHD-ULTRA |
| tubing(larger) | Cole-Parmer Instrument Company | 06418-02 | Tygonreg microbore tubing, 0.020″ ID x 0.060″ OD |
| tubing(smaller) | Cole-Parmer Instrument Company | 06417-11 | PTFE microbore tubing, 0.012″ ID x 0.030″ OD |
Riferimenti
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