Analyse av Pulmonal dendrittiske celle modning og migrasjon under Allergisk Airway betennelse

Summary

Vi beskriver en strategi for å overvåke modning og migrasjon av lunge dendrittiske celler som reaksjon på ovalbumin i innstillingen av ovalbumin indusert allergisk Airway betennelse. Denne strategien kan endres for å vurdere migrasjon av pulmonale dendrittiske celler i innstillingene for infeksjon.

Abstract

Dendrittiske celler (DCS) er de sentrale aktørene som er involvert i initiering av adaptive immunresponsen ved å aktivere antigen-spesifikke T celler. Utviklingsland er til stede i perifere vev i steady state, men som svar på antigen stimulering, DCS ta opp antigenet og raskt vandrer til drenering lymfeknuter hvor de setter i gang T-celle respons mot antigen ^1,2. I tillegg, DCS også spille en nøkkelrolle i å initiere autoimmune samt allergisk immunrespons ^tre.

Utviklingsland spiller en vesentlig rolle både initiering av immunrespons og induksjon av toleranse i innstillingen av lunge miljø ^4. Lung miljø er i stor grad tolerogenic, på grunn av eksponering for stort utvalg av miljømessige antigener ^5. Men i enkelte individer er det en pause i toleranse, noe som fører til induksjon av allergi og astma. I denne studien, beskriver vi en strategi som kan brukes til å overvåke luftveiene DC modning og MIGrasjon i respons på antigen brukes for sensibilisering. Måling av luftveier DC modning og migrasjon åpner for vurdering av kinetikken av immunrespons i luftveiene allergisk betennelse og også bistår i å forstå omfanget av den påfølgende immunresponsen sammen med de underliggende mekanismene.

Vår strategi er basert på bruk av ovalbumin som allergifremkallende middel. Ovalbumin-indusert allergisk astma er en mye brukt modell for å reprodusere luftveiene eosinofili, lunge betennelse og forhøyede IgE funnet under astma ^6,7. Etter allergi, er mus utfordret av intranasal levering av FITC merket ovalbumin, som gir mulighet for spesifikk merking av luftveiene utviklingsland som opptak ovalbumin. Deretter bruker flere DC spesifikke markører, kan vi vurdere modningen av disse DCS og kan også vurdere sin vandring til de drenerende lymfeknutene ved å ansette flowcytometri.

Protocol

1. Sensibilisering av Mus med ovalbumin Forbered en løsning av OVA (klasse V, Sigma, MO) i steril PBS i en konsentrasjon på 1 mg / ml (Løsningen kan oppbevares ved -80 ° C). For å forberede OVA-Alum blandingen, ta Alum i et rør og legge OVA løsning i en dropwise mote mens virvling røret i forholdet 1:1. Rør blandingen i 30 minutter og bruk med en gang etter blanding. Bruk en 1 ml sprøyte, injisere 0,2 ml av blandingen i musen bukhulen og gjenta injeksjon igjen etter 2 uker. …

Discussion

Metoden som presenteres her tilbyr en flowcytometri tilnærming for å analysere lunge DCS, basert på leveranse av OVA-FITC for luftveier utfordring. Dette åpner for selektiv overvåkning av lunge DCS, som tar opp OVA-FITC og derfor DC populasjoner, som overvåkes er effektivt de som deltar i luftveiene immunrespons i løpet av OVA-indusert allergisk Airway betennelse. I kontroll mus, i fravær av allergisk luftveiene betennelse, antall trekkende DCS (OVA-FITC + DCS) identifisert i MLN er tegn på basaldoser av DC mig…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number
Ovalbumin	Sigma-Aldrich	A5503
Alum	Thermo Scientific	77161
OVA-FITC	Sigma-Aldrich	A9771
Collagenase D	Roche	11088858001
Antibodies	e-Bioscience