L'analyse de la maturation des cellules dendritiques pulmonaire et de la migration au cours de l'inflammation allergique des voies respiratoires
Summary
Nous décrivons une stratégie pour surveiller la maturation et la migration des cellules dendritiques pulmonaires en réponse à l'ovalbumine dans le cadre de l'inflammation induite par l'ovalbumine allergique des voies respiratoires. Cette stratégie peut être modifié afin d'évaluer la migration des cellules dendritiques pulmonaires dans les paramètres de l'infection.
Abstract
Les cellules dendritiques (CD) sont les principaux acteurs impliqués dans l'initiation de la réponse immunitaire adaptative en activant les cellules T spécifiques de l'antigène. PED sont présents dans les tissus périphériques à l'état d'équilibre, mais en réponse à une stimulation antigénique, les CD prennent de l'antigène et rapidement migrer vers les ganglions lymphatiques drainant où ils initient la réponse des cellules T contre l'antigène 1,2. En outre, les PED jouent également un rôle clé dans le déclenchement auto-immune ainsi que la réponse immunitaire allergique 3.
PED jouer un rôle essentiel dans l'initiation de la réponse immunitaire et l'induction de la tolérance dans le cadre de 4 environnement du poumon. L'environnement du poumon est largement tolérogène, en raison de l'exposition à la vaste gamme d'antigènes de l'environnement 5. Toutefois, chez certaines personnes il ya une rupture de la tolérance, ce qui conduit à l'induction de l'allergie et l'asthme. Dans cette étude, nous décrivons une stratégie, qui peut être utilisé pour surveiller des voies respiratoires DC maturation et migration en réponse à l'antigène utilisé pour la sensibilisation. La mesure de la maturation des voies respiratoires DC et de la migration permet d'évaluer la cinétique de la réponse immunitaire au cours de l'inflammation allergique des voies respiratoires et aide aussi à comprendre l'ampleur de la réponse immunitaire subséquente ainsi que les mécanismes sous-jacents.
Notre stratégie est basée sur l'utilisation de l'ovalbumine comme un agent sensibilisant. Ovalbumin induite par l'asthme allergique est un modèle largement utilisé pour reproduire l'éosinophilie des voies aériennes, l'inflammation pulmonaire et une élévation des taux d'IgE trouvés lors de l'asthme 6,7. Après la sensibilisation, les souris sont contestés par l'administration intranasale d'ovalbumine marquée FITC, ce qui permet d'étiquetage spécifique des PED voies respiratoires ovalbumine absorption qui. Ensuite, en utilisant plusieurs marqueurs spécifiques DC, nous pouvons évaluer la maturation de ces pays en développement et peuvent également évaluer leur migration vers les ganglions lymphatiques drainant en employant la cytométrie en flux.
Protocol
Discussion
La méthode présentée ici propose une approche basée sur la cytométrie de flux pour analyser les PED pulmonaires, basées sur la livraison d'OVA-FITC pour le défi des voies respiratoires. Ceci permet la surveillance sélective des PED pulmonaires, qui prennent OVA-FITC et par conséquent, les populations de DC, qui sont contrôlés sont effectivement ceux qui participent à la réponse immunitaire des voies respiratoires au cours de l'inflammation induite par OVA allergique des voies respiratoires. Chez les…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été financé par des subventions des IRSC et des FC au Canada au Dr Jim Hu et par une bourse de doctorat décerné à Rahul Kushwah par CF Canada.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Ovalbumin | Sigma-Aldrich | A5503 |
| Alum | Thermo Scientific | 77161 |
| OVA-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 |
| Collagenase D | Roche | 11088858001 |
| Antibodies | e-Bioscience |
Riferimenti
- Kushwah, R., Hu, J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 20, (2011).
- Kushwah, R., Hu, J. Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system. Immunology. 133, 409-419 (2011).
- Lambrecht, B. N., Hammad, H. Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma. Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).
- Hammad, H., Lambrecht, B. N. Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma. Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).
- Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. Tolerizing allergic responses in the lung. Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).
- Herz, U. The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma. Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).
- Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses. Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).
- Nakae, S. TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice. J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).
- Guth, A. M. Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).
- Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery. J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).
- Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells. J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).
