Summary

알레르기기도 염증 동안 폐 돌기 세포 성숙과 마이 그 레이션 분석

Published: July 23, 2012
doi:

Summary

우리는 ovalbumin 유도된 알레르기기도 염증의 설정에서 ovalbumin에 대한 응답으로 폐 돌기 세포의 성숙 및 마이 그 레이션을 모니터링하는 전략을 설명합니다. 이 전략은 감염의 설정에서 폐 돌기 세포의 이주를 평가하기 위해 수정할 수 있습니다.

Abstract

돌기 세포 (DC가)는 항원에 특정한 T 세포를 활성화하여 적응 면역 반응의 개시에 관여 핵심 선수입니다. DC가가 안정된 상태에서 말초 조직에 존재 있지만 항원 자극에 대한 응답으로, DC가이 항원을 가지고 급속하게 그들이 항원에 대한 T 세포 1,2 응답을 시작 배수 림프절로 마이 그 레이션. 또한 DC가 또한자가 면역 질환뿐만 아니라 알레르기 면역 반응 3 시작에서 핵심 역할을한다.

DC가이 폐 환경 4 설정에서 관용의 면역 반응과 유도의 두 개시에 필수적인 역할을한다. 폐 환경은 환경 항원 5의 광대한 배열과 노출로 인하여, 크게 tolerogenic입니다. 그러나 어떤 사람은 알레르기와 천식의 유도로 연결 오차의 휴식,있다. 본 연구에서 우리는기도의 DC 성숙과 미그을 모니터링하는 데 사용할 수있는 전략을 설명sensitization에 사용되는 항원에 대한 반응으로 배급. 기도의 DC 성숙 및 마이 그 레이션의 측정은기도 알레르기 염증시 면역 반응의 동력학의 평가를 허용하며 기본 메커니즘과 함께 이후의 면역 반응의 정도를 이해하는데 도움이됩니다.

우리의 전략 sensitizing 대리인으로 ovalbumin의 사용을 기반으로합니다. Ovalbumin 유도된 알레르 기성 천식은기도 eosinophilia, 폐의 염증과 천식 6,7 중 발견된 상승된 IGE 수준을 재현하기 위해 널리 사용되는 모델입니다. sensitization 후, 마우스는 이해의 ovalbumin기도 DC가 특정 라벨링을 허용 FITC 분류 ovalbumin의 비강 전달에 의해 도전을하고 있습니다. 다음으로 여러 DC 특정 마커를 사용하여, 우리는 이러한 DC가의 성숙을 평가할 수 있으며 유동세포계측법를 채용하여 배수 림프절 자신의 마이 그 레이션을 평가할 수 있습니다.

Protocol

1. Ovalbumin으로 마우스의 Sensitization OVA (학년 V, 시그마, MO)의 솔루션을 준비 한 MG / ML의 농도에서 멸균 PBS에서 (솔루션은 -80 ° C에 저장할 수 있습니다.) OVA-명반 혼합물을 준비하기 위해 튜브에서 명반을 가지고 1시 1분의 비율로 튜브를 vortexing하면서 dropwise 패션 OVA 솔루션을 추가합니다. 30 분간 혼합 저어과 믹싱 후 바로 사용하십시오. 1 ML의 주사기를 사용하여, 마우스 복막…

Discussion

여기에 제시된 방법은기도 도전 OVA-FITC의 제공을 바탕으로 폐 DC가를 분석하기위한 유동세포계측법 기반 접근 방식을 제공합니다. 이것은 OVA-FITC을 가지고 감시 따라서 직류 인구가 효과적으로 OVA 유발 알레르기기도 염증 과정 중에기도 면역 반응에 참여하는 사람들입니다 폐동맥 DC가의 선택적 모니터링을 허용합니다. 컨트롤 마우스에서 알레르기기도 염증의 부재에서, MLN에서 확인된 철새 DC가?…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 박사 짐 후진타오에 CIHR과 CF 캐나다 보조금 의해 CF 캐나다로 라훌 Kushwah에게 수여 박사 학생이기 의해 재정 지원되었다.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number
Ovalbumin Sigma-Aldrich A5503
Alum Thermo Scientific 77161
OVA-FITC Sigma-Aldrich A9771
Collagenase D Roche 11088858001
Antibodies e-Bioscience  

Riferimenti

  1. Kushwah, R., Hu, J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 20, (2011).
  2. Kushwah, R., Hu, J. Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system. Immunology. 133, 409-419 (2011).
  3. Lambrecht, B. N., Hammad, H. Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma. Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).
  4. Hammad, H., Lambrecht, B. N. Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma. Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).
  5. Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. Tolerizing allergic responses in the lung. Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).
  6. Herz, U. The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma. Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).
  7. Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses. Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).
  8. Nakae, S. TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice. J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).
  9. Guth, A. M. Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).
  10. Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery. J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).
  11. Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells. J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).
check_url/it/4014?article_type=t

Play Video

Citazione di questo articolo
Kushwah, R., Hu, J. Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation. J. Vis. Exp. (65), e4014, doi:10.3791/4014 (2012).

View Video