Analys av Pulmonell mognad av dendritiska celler och migration under Allergisk luftvägsinflammation
Summary
Vi beskriver en strategi för att övervaka mognad och migration av pulmonella dendritiska celler som svar på ovalbumin i inställningen av ovalbumin-inducerad allergisk inflammation i luftvägarna. Denna strategi kan ändras för att bedöma migration av pulmonell dendritiska celler i inställningarna för infektion.
Abstract
Dendritiska celler (DC) är de viktigaste aktörerna inom initiering av adaptiva immunsvaret genom att aktivera antigen-specifika T-celler. DC: er är närvarande i perifera vävnader i stationärt tillstånd, men som svar på antigen stimulering, DC: er tar upp antigenet och snabbt migrera till de dränerande lymfkörtlarna där de initierar T-cellsvar mot antigenet 1,2. Dessutom utvecklingsländer spelar också en viktig roll i att initiera autoimmun samt allergiska immunsvar 3.
DC spelar en viktig roll i både initiering av immunsvar och induktion av tolerans i fastställandet av lungan miljön 4. Lung miljön är i stort sett tolerogena, på grund av exponering för stora utbud av miljö-antigener 5. Emellertid, i vissa individer finns ett brott i tolerans, vilket leder till induktion av allergi och astma. I denna studie beskriver vi en strategi som kan användas för att övervaka luftvägarna DC mognad och MIGranson som svar på antigen som används för sensibilisering. Mätning av luftvägarna DC mognad och migration möjliggör en bedömning av kinetiken av immunsvaret under luftvägarna allergisk inflammation och även hjälper till att förstå omfattningen av den efterföljande immunsvaret tillsammans med de bakomliggande mekanismerna.
Vår strategi är baserad på användningen av ovalbumin som en sensibiliserande agent. Ovalbumin-inducerad allergisk astma är en allmänt använd modell för att återskapa luftvägarna eosinofili, lunginflammation och förhöjda IgE-nivåer som konstaterades under astma 6,7. Efter sensibilisering, möss utmanas av intranasal leverans av FITC-märkt ovalbumin, vilket möjliggör för specifik märkning av luftvägarna utvecklingsländer som upptag ovalbumin. Därefter använder flera DC specifika markörer, kan vi utvärdera mognaden hos dessa DCs och kan också utvärdera deras migrering till de dränerande lymfkörtlarna genom användning av flödescytometri.
Protocol
Discussion
Metoden som presenteras här har en flödescytometri metod för att analysera lung utvecklingsländer, baserat på leverans av OVA-FITC för luftvägarna utmaning. Detta tillåter selektiv kontroll av pulmonella DCS, vilka tar upp OVA-FITC och därför är de DC populationer, som övervakas är ett effektivt de som deltar i luftvägarna immunsvar under loppet av OVA-inducerad allergisk inflammation i luftvägarna. I kontrollmöss, i avsaknad av allergiska inflammationen i luftvägarna, antalet flyttande DCS (OVA-FITC + …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete har finansierats av CIHR och CF Kanada bidrag till Dr Jim Hu och en doktorand tilldelas Rahul Kushwah av CF Kanada.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Ovalbumin | Sigma-Aldrich | A5503 |
| Alum | Thermo Scientific | 77161 |
| OVA-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 |
| Collagenase D | Roche | 11088858001 |
| Antibodies | e-Bioscience |
Riferimenti
- Kushwah, R., Hu, J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 20, (2011).
- Kushwah, R., Hu, J. Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system. Immunology. 133, 409-419 (2011).
- Lambrecht, B. N., Hammad, H. Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma. Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).
- Hammad, H., Lambrecht, B. N. Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma. Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).
- Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. Tolerizing allergic responses in the lung. Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).
- Herz, U. The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma. Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).
- Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses. Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).
- Nakae, S. TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice. J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).
- Guth, A. M. Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).
- Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery. J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).
- Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells. J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).
