Summary

基本的<em>线虫</em>方法:同步和观察

Published: June 10, 2012
doi:

Summary

维护和线虫传播的难易<em> C。线虫</em>使一个很好的模式生物工作。同步蠕虫病毒的可能性,使相当数量的科目,在同一发育阶段的工作,促进一个特定的进程,在许多动物的研究。

Abstract

线虫的分子和发育生物学的研究,在七十年代初开始,由悉尼·布雷,它已被广泛用来作为模式生物1。C。线虫具有关键属性,如简单,透明和生命周期短,都使得它一个合适的2多年的基本生物学研究的实验系统。这种线虫的发现具有广泛的影响,因为许多细胞和分子过程控制动物发展进化保守。

通过胚胎阶段和四个幼虫进入前动物达到成年线虫的生命周期。发展可以采取2至4天,根据温度。在每一个阶段,可以观察到几个特征性状。其完整的细胞谱系知识4,5与深annotat的共同其基因组的离子变成一个领域模型这种线虫老化7,8神经生物学,干细胞生物学9和生殖细胞生物学10多元。

一个额外的功能,使三线虫一个有吸引力的工作模式是获得人口在一个特定的阶段同步蠕虫通过一个相对简单的协议的可能性。易于维护和传播这种线虫添加到同步的可能性提供一个功能强大的工具来获得大量的蠕虫病毒,它可以RNAi屏幕,芯片,大规模测序,如小或高通量实验的各种使用,免疫或原位杂交,等等。

由于其透明度,C。线虫结构可以区分使用微分干涉对比显微镜显微镜下,也Nomarski显微镜复制。利用DNA荧光的DAPI(4',6-diamidino-2-苯基)粘结剂,例如,可能会导致个别细胞的识别和定位,以及与他们相关的亚细胞结构/缺陷。

Protocol

1。议定书:11漂白培养蠕虫 C.人口众多线虫可以得到培养他们无论是在液体介质或固体介质中板。它们通常生长在固体NGM的(线虫的生长介质)和美联储与E.大肠杆菌的细菌,它被添加到的板块无论是活着还是死了(由紫外线12死亡,13热或冷14)。最常见的程序使用现场OP50 E。大肠杆菌 ,这是在尿嘧啶合成缺陷,并?…

Discussion

线虫同步

几个漂白解决方案已被描述。我们尝试不同的食谱( 见表一 ),在我们的手中,他们没有表现出显着性差异在蠕虫人口同步( 图1)。然而,我们的实验也表明,参数,如温度( 图2),比漂白液:虫量( 图3)和M9的体积与胚胎培养孵化( 图4)做影响蠕虫的生存与文化的适当通风。在我们的晃动的条件?…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

作者想承认,AGAUR(博士奖学金到劳拉Fontrodona),MICINN(PTA项目配套蒙特塞拉特肝门德拉·里瓦),研究所的Salud的卡洛斯三世(米格尔Servet计划支持朱利安Cerón),玛丽·居里表意文字,ISCIII和IDIBELL融资实验室。

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Citazione di questo articolo
Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cerón, J. Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation. J. Vis. Exp. (64), e4019, doi:10.3791/4019 (2012).

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