Nós descrevemos um<em> Ex vivo infecção</em> Modelo para a visualização de interações diretas de patógenos bacterianos com células de trompas. O modelo de tecido inteiro órgão foi estabelecido para investigar<em> C. trachomatis</em> Patologia induzida ao tubo de falópio feminino em "life-like" condições.
Infecções do trato genital por Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) são as mais freqüentes doenças sexualmente transmitidas em mulheres em todo o mundo. Depuração ineficiente ou persistência dos patógenos pode levar a infecções ascendentes do trato genital e é suposto causar danos inflamatória crônica de 1,2 tecidos infectados. Como consequência, sequelas clínicas graves como a doença inflamatória pélvica (DIP), oclusão tubária e infertilidade pode ocorrer 3,4.
A maioria das pesquisas com C. trachomatis foi conduzida em linhas de células epiteliais (por exemplo, células HEp-2 e HeLa-229) ou em ratinhos. No entanto, como com a célula de cultura de modelos baseados, eles nem reflectir a fisiologia do tecido nativo nem a patofisiologia da C. infecções do tracto genital trachomatis in vivo 5. Limitações adicionais são dadas pelo facto de cascatas de sinalização centrais (por exemplo IFN-γ MEDIATed JAK / STAT via de sinalização) que controlam o crescimento intracelular por clamídia diferem fundamentalmente entre ratos e seres humanos 6,7. Nós e os outros, portanto, estabeleceu um conjunto de órgãos modelo trompa de Falópio para investigar interações diretas entre C. trachomatis e humano da trompa de Falópio ex vivo de células 8,9.
Para este efeito, humanos trompas de Falópio de mulheres submetidas a histerectomia foram recolhidas e infectados com C. trachomatis serovar D. Dentro de 24 h após a infecção amostra, onde analisadas em microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM) para detectar Chlamydia trachomatis mediada dano epitelial, bem como C. formação trachomatis inclusão no tecido de Falópio.
Visualização do patógeno-induzido dano ao tecido infectado é árdua e muitas vezes limitado a procedimentos experimentais em camundongos. Nós estabelecemos um modelo de infecção ex vivo em humanos trompas de Falópio para analisar C. infecções do tracto trachomatis fêmea genital superior. Através da utilização deste método, fomos capazes de visualizar C. trachomatis – dano induzido ao epitélio humano tubo de falópio dentro de uma infecção pós dia. Edema celular e lise eram típicas alterações morfológicas que foram observados em C. trachomatis – infectadas trompas de Falópio, mas não em controlos não infectados. Análises em MET revelaram que clamídias implementar um ciclo típico de desenvolvimento intracelular nos tecidos infectados, mostrando inclusões de grande porte com re diferenciadas corpos elementares, mas também inclusões menores, com corpos reticulados ampliadas que podem indicar a persistência. No entanto, o quadro morfológico sozinho não é suficiente para discriminar entre replinfecções icating e persistentes, que são caracterizadas por metabolismo reduzido e uma maior resistência aos agentes antimicrobianos 10.
Destruição do epitélio de infectados trompas de falópio ou é devido ao rompimento de C. trachomatis – infectadas células epiteliais após a conclusão do ciclo de desenvolvimento intracelular e libertação de infecciosas corpos elementares ou a libertação de citoquinas pró-inflamatórias 8. Induzida por patógeno dano tecidual e de acolhimento induzidas reações imunes contra C. trachomatis devem ser os principais fatores que levam à perda da função das células epiteliais, fibroblastos e remodelação infertilidade tubária, finalmente, in vivo 8,11.
Uma das principais limitações deste modelo é a ausência de células inflamatórias que dificulta a análise dos efeitos secundários para o C. inicial trachomatis infecção do epitélio trompa de Falópio. No entanto, o modelo é apquada para investigar diferentes condições ambientais (por exemplo, o teor de oxigénio) e da resposta do hospedeiro-imune inicial em C. aguda trachomatis 8,9. Existem planos para se estabelecer um modelo para testes de antimicrobianos contra C. trachomatis em toda humanos trompas de falópio e caracterizar os estados metabólicos dos diferentes estágios de desenvolvimento observadas no epitélio das trompas por 2-fótons microscopia de varredura a laser.
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi financiado pela DFG-Cluster de Excelência "Inflamação na Interfaces" (RA-Se, RA-D). Somos gratos pela excelente assistência técnica de Kristin Wischnat.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | PAA | E15-843 | |
RPMI | PAA | R15-802 | |
FCS | PAA | A15-101 | |
Cycloheximide | Sigma – Aldrich | ||
SPG Buffer | various | see recipe below | |
Monti’s fixative | various | see recipe below | |
sodium cacodylate buffer | various | see recipe below | |
Richardson’s stain | various | see recipe below |
Recipes:
1. SPG Buffer
2. 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.35.
3. Monti’s fixative
4. Richardson’s stain