Мы описываем<em> Бывший естественных условиях заражение</em> Модель для визуализации прямого взаимодействия с бактериальными патогенами с человеческими клетками маточных труб. Вся модель ткани органа была создана для расследования<em> С. трахоматис</em> Индуцированной патологии женских маточных труб при "жизни, как" условия.
Инфекций половых путей с хламидиоза (хламидийной) являются наиболее частыми передается половым путем заболеваний у женщин по всему миру. Неэффективное разрешение или сохранение патогенов может привести к возрастанию инфекции верхних половых путей и, как предполагается, вызывают хронические воспалительные повреждения инфицированных 1,2 ткани. Как следствие, серьезные клинические осложнения, как воспалительные заболевания тазовых органов (PID), окклюзии маточных труб и бесплодие может возникнуть 3,4.
Большинство исследований с C. трахоматис была проведена в эпителиальных клеточных линий (например, клеток НЕр-2 и HeLa-229) или у мышей. Однако, как и клеточных культур на основе моделей, они не отражают физиологии родной ткани, ни патофизиологии C. трахоматис половых инфекций в естественных условиях 5. Дальнейшие ограничения задаются на то, что центральные сигнальных каскадов (например, ИФН-γ mediatред JAK / STAT сигнального пути), которые контролируют внутриклеточную хламидийной рост принципиально отличаются от мышей и человека 6,7. Мы и другие поэтому создали целый орган маточных труб модель для исследования прямых взаимодействий между C. трахоматис и человеческих клеток фаллопиевых труб бывших естественных 8,9.
Для этого человека маточных труб у женщин, подвергающихся гистерэктомии были собраны и инфицированных C. трахоматис серовар D. В течение 24 ч после инфекции, образец которой анализировались с помощью сканирующего электронного микроскопа (SEM) и просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) с целью выявления хламидиоза опосредовано эпителиальных повреждений, а также C. трахоматис включения образования в маточной ткани.
Визуализация патоген-индуцированной вреда инфицированных тканей трудным и часто ограничивается экспериментальной процедуры на мышах. Мы создали модель распространения инфекции в бывших естественных условиях в человеческом маточных труб, чтобы проанализировать C. трахоматис инфекции верхних женских половых органов. С использованием этого метода, мы смогли визуализировать C. трахоматис – индуцированного повреждения эпителия человека маточных труб в течение одного дня после инфекции. Сотовые отек и лизис были характерны морфологические изменения, которые наблюдаются в С. трахоматис – инфицированных маточных труб, но не в неинфицированных управления. ТЕМ анализ показал, что хламидии реализовать типовую внутриклеточного цикла развития в инфицированных тканях, показывая большой включений с повторной дифференцированный элементарные тельца, но и меньше включений с увеличенными органами сетчатые, что может указывать на сохранение. Тем не менее, морфологическая картина сама по себе не достаточно, чтобы различать герicating и стойких инфекций, которые характеризуются снижением обмена веществ и повышенной устойчивостью к антибиотикам 10.
Разрушение эпителия маточных труб инфицированных либо в связи с нарушением C. трахоматис – инфицированных эпителиальных клеток после завершения внутриклеточный цикл развития и выпуска инфекционные элементарные тельца или освобождение провоспалительных цитокинов 8. Возбудитель-индуцированного повреждения тканей и хост-индуцированной иммунной реакции против C. трахоматис должны быть основные факторы, приводящие к потере эпителиального функции клеток, фибробластов реконструкции и, наконец, трубное бесплодие в естественных условиях 8,11.
Одним из основных ограничений этой модели является отсутствие воспалительных клеток, что затрудняет анализ вторичных эффектов на начальном C. трахоматис инфекции маточных труб эпителия. Тем не менее, модель APpropriate для изучения различных условиях окружающей среды (например, кислорода) и начальным принимающей иммунного ответа при острой C. трахоматис инфекций 8,9. Дальнейшие планы по созданию моделей для тестирования препаратов против C. инфекции у человека все фаллопиевых труб и для характеристики метаболического состояния разных стадиях развития наблюдается в трубной эпителия 2-фотонного микроскопа лазерного сканирования.
The authors have nothing to disclose.
Эта работа выполнена при финансовой поддержке DFG-кластер Excellence "Воспаление в интерфейс" (RA-Если RA-D). Мы благодарны за отличную техническую помощь Кристин Wischnat.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | PAA | E15-843 | |
RPMI | PAA | R15-802 | |
FCS | PAA | A15-101 | |
Cycloheximide | Sigma – Aldrich | ||
SPG Buffer | various | see recipe below | |
Monti’s fixative | various | see recipe below | |
sodium cacodylate buffer | various | see recipe below | |
Richardson’s stain | various | see recipe below |
Recipes:
1. SPG Buffer
2. 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.35.
3. Monti’s fixative
4. Richardson’s stain