Se describe un<em> Ex vivo infección</em> Modelo para la visualización de las interacciones directas de los patógenos bacterianos con células humanas de la trompa de Falopio. El modelo de todo el tejido del órgano se creó para investigar<em> C. trachomatis</em> La patología inducida por la trompa de Falopio en las mujeres "como" condiciones de vida.
Infecciones del tracto genital por Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) son las más frecuentes enfermedades de transmisión sexual en las mujeres de todo el mundo. Aclaramiento de ineficaz o la persistencia de los patógenos puede dar lugar a infecciones ascendentes del tracto genital superior y se supone para causar daño inflamatorio crónico de 1,2 tejidos infectados. Como consecuencia, graves secuelas clínicas como la enfermedad inflamatoria pélvica (EIP), oclusión de las trompas e infertilidad puede ocurrir 3,4.
La mayor parte de la investigación con C. trachomatis se ha realizado en líneas de células epiteliales (por ejemplo, células HEp-2 y HeLa 229-) o en ratones. Sin embargo, como con modelos de cultivo a base de células, que no reflejan ni la fisiología del tejido nativo ni la fisiopatología de C. trachomatis del tracto genital en vivo 5. Otras limitaciones están dadas por el hecho de que centrales cascadas de señalización (por ejemplo, el IFN-γ MEDIATed JAK / STAT vía de señalización) que controlan el crecimiento intracelular Chlamydia difieren fundamentalmente entre los ratones y los seres humanos 6,7. Nosotros y otros por lo tanto, estableció un modelo de órgano en su totalidad las trompas de Falopio para investigar las interacciones directas entre C. trachomatis y las trompas de Falopio humana ex vivo las células 8,9.
Para este propósito, las trompas de Falopio humanos de las mujeres sometidas a histerectomía se recogieron y se infectan con C. trachomatis serovar D. Dentro de las 24 h después de la infección, la muestra donde se analizaron mediante microscopía electrónica de barrido (SEM) y microscopía electrónica de transmisión (TEM) para detectar la Chlamydia trachomatis mediado daño epitelial, así como C. trachomatis formación inclusión en el tejido de Falopio.
Visualización de patógenos inducida por el daño al tejido infectado es arduo y, a menudo limitada a los procedimientos experimentales en ratones. Hemos establecido un modelo in vivo en humanos la infección ex trompas de Falopio para analizar C. trachomatis de la parte superior del tracto genital femenino. Mediante el uso de este método, hemos sido capaces de visualizar C. trachomatis – inducida por los daños al epitelio de las trompas de Falopio humana dentro de un día después de la infección. Inflamación celular y la lisis eran típicos los cambios morfológicos que se observaron en C. trachomatis – infectados trompas de Falopio, pero no en los controles no infectados. TEM análisis reveló que las clamidias poner en práctica un típico ciclo de desarrollo intracelular en los tejidos infectados, que muestra grandes inclusiones con la re-diferenciados cuerpos elementales, sino también pequeñas inclusiones con cuerpos reticulados agrandados que pudieran indicar la persistencia. Sin embargo, la imagen morfológica por sí sola no es suficiente para discriminar entre REPLinfecciones icating y persistente, que se caracterizan por una disminución del metabolismo y aumento de la resistencia a los antimicrobianos 10.
La destrucción del epitelio en las trompas de Falopio infectadas es o bien debido a la interrupción de C. trachomatis – las células epiteliales infectadas después de la finalización del ciclo de desarrollo intracelular y la liberación de los cuerpos elementales infecciosos o la liberación de citoquinas pro-inflamatorias 8. Patógenos inducida por daño tisular e indujo host reacciones inmunes contra C. trachomatis se supone que son los principales factores que conducen a la pérdida de la función de las células epiteliales, fibroblastos y la remodelación de la infertilidad tubárica en vivo, finalmente 8,11.
Una de las principales limitaciones de este modelo es la ausencia de células inflamatorias que dificulta el análisis de los efectos secundarios a la inicial C. trachomatis infección del epitelio de las trompas de Falopio. Sin embargo, el modelo es APpropriate para investigar diferentes condiciones ambientales (por ejemplo, contenido de oxígeno) y el primer host de la respuesta inmune en la C aguda trachomatis 8,9. Otros planes son establecer un modelo para la prueba de los antimicrobianos en contra de C. trachomatis en las trompas de Falopio humanos enteros y caracterizar los estados metabólicos de las diferentes etapas evolutivas observadas en el epitelio de las trompas de 2-fotones microscopía de escaneo láser.
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo fue apoyado por la DFG-Cluster de Excelencia "La inflamación en las interfaces" (AR-Si, RA-D). Estamos muy agradecidos por la excelente asistencia técnica de Kristin Wischnat.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | PAA | E15-843 | |
RPMI | PAA | R15-802 | |
FCS | PAA | A15-101 | |
Cycloheximide | Sigma – Aldrich | ||
SPG Buffer | various | see recipe below | |
Monti’s fixative | various | see recipe below | |
sodium cacodylate buffer | various | see recipe below | |
Richardson’s stain | various | see recipe below |
Recipes:
1. SPG Buffer
2. 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.35.
3. Monti’s fixative
4. Richardson’s stain