ヒト膵臓の収集プロトコル
Summary
このビデオでは、複数のストレージ形式にヒト膵臓を処理するための解剖の手順を示しています。解剖学的なオリエンテーションは、地域の膵島の組成と密度の定義を可能にするために、膵臓領域を通して維持されています。
Abstract
この解離およびサンプリング手順は、死体臓器提供者から回収された膵臓の準備を標準化するための糖尿病（nPOD）プログラムと膵臓の臓器提供者のためのネットワーク用に開発されました。膵臓は、横軸の内側全体に連続横断切片に続いて3つの主要領域（頭、体、尾）に分かれています。交互にセクションが固定パラフィン包埋に使用され、新鮮凍結ブロックと残りのサンプルは、DNA、RNA、またはタンパク質を分離するため、RNアーゼ阻害剤の有無に関わらずどちらかは、スナップ凍結試料調製のために刻まれています。膵臓の解剖手順の全体的な目標は、解剖学的配向性を維持しながら、全体の膵臓をサンプリングすることである。
膵島組成、サイズ、および数字の面で内分泌細胞の不均一性は、齧歯類膵島1に比べてヒト膵島 のために報告されています。膵頭部、膵体尾部領域からのヒト膵島の大半はインスリンcontaininで構成されていますgのβ細胞は、低い割合に続いてグルカゴンを含有するα細胞、δ細胞をソマトスタチン含有します。膵臓ポリペプチドを含有するPP細胞とグレリン含有イプシロン細胞も存在するが、少数である。対照的に、鉤状領域は主に2膵ポリペプチドを含有するPP細胞から構成されている島が含まれています。これらの地域の膵島バリエーションが発達の違いから生じる。膵臓は、前腸と胃や十二指腸、背3腹葉の動きやヒューズの回転後の腹側と背側膵臓芽から開発しています。腹葉は背側葉、臓器の残りの部分を生じさせる一方鉤状突起を含む頭部の後方部分を形成する。地域の膵臓の変化はまた、尾部領域では1型糖尿病で選択萎縮を受けて他の地域と背側葉由来の成分に比べて高い膵島密度を有すると報告されている<sアップ> 4,5。
追加の臓器や組織は、多くの場合、臓器提供者から回収し、膵臓のリンパ節、脾臓および非膵臓リンパ節を含んでいる。これらのサンプルは、凍結保存細胞の単離を加えた膵臓の場合と同様の形式で回収される。近位十二指腸が膵臓に含まれている場合は、十二指腸粘膜にはパラフィンや冷凍ブロックとひき肉スナップ凍結の準備のために収集されることがあります。
Protocol
Discussion
この手順の目的は、複数のコレクションのサイト間で調和することができます標準の膵臓の処理を定義するため、異なったグループによって得られた結果の比較を可能にすることです。解剖法は、域内の分割に続く主要な膵臓領域の注釈の追加の手順と標準的な外科病理プラクティスに基づいています。生物検体処理方法の標準化などの国立がん研究所6として国家のバイオバンクの?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、ドナーの家族や専門家の支援のため、本研究とマリア·マルティーノとイリーナKusmartsevaに関与する臓器調達機関に感謝します。この作品は、糖尿病患者の膵臓の臓器提供者のネットワークをサポートする青少年糖尿病研究財団（MC-T.、MA）によって資金を供給された。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Dissection instruments including scalpels with 22 blades | Various | Various | |
| Centrifuge tubes (15 and 50 ml) | Fisher Scientific | 05-539-5, 430828 | Sterile |
| Cryotubes(1.8 ml) | VWR North America | 89004-300 | Sterile, bar codes optional |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Surgical Pathology Ink | |||
| Cassettes | Mercedes Medical | CAS ECO109 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher Scientific | 23-245-685 | |
| OCT Freezing Media | TissueTek | 4583 | |
| Molds | ThermoScientific | 58952 | Various sizes |
| Isopentane | Fisher Scientific | O3551-4 | OCT chilling bath |
| Dry ice | OCT chilling bath | ||
| Liquid nitrogen in Dewar flask | Snap freezing cryovials | ||
| Cell culture dish (100mm) | Corning | 430167 | Sterile |
| Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | Sterile, store refrigerated, glutamine included |
| Fetal Bovine Serum | Cellgro | 35-010-CV | Sterile, store frozen aliquots |
| Penicillin/Streptomycin/Antifungal | GIBCO | 15240-062 | Sterile, store frozen aliquots |
| Type 9 Paraffin | Richard-Allan Scientific | 8337 | |
| 1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | Sterile |
| 16% Paraformaldehyde | EM Sciences | 15710 | Make fresh, store refrigerated |
| 8% Glutaraldehyde | EM Sciences | 16019 | Make fresh, store refrigerated |
| Biosafety Level 2 hood | Various | ||
| Ultra-low freezer | Various | ||
| Sakura Cassette Printer | Sakura | ||
| Sakura VIP300 | Sakura | Automatic paraffin processor | |
| Paraffin Embedding Station | ThermoFisher |
Table 1. Specific reagents and equipment.
Riferimenti
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