Protocole de collecte des pancréas humain
Summary
Cette vidéo montre une procédure pour le traitement de la dissection pancréas humain dans des formats multiples de stockage. L'orientation anatomique est maintenu dans toutes les régions du pancréas pour permettre la définition de la composition et la densité de l'îlot régionale.
Abstract
Cette dissection et la procédure d'échantillonnage a été développé pour le réseau de donneurs d'organes pancréatiques avec diabète (nPOD) programme visant à normaliser la préparation du pancréas récupéré de donneurs d'organes cadavériques. Le pancréas est divisé en 3 régions principales (tête, corps, queue), suivis par série des coupes transversales à travers le dedans de l'axe latéral. Sections alternées sont utilisées pour la paraffine fixe et frais blocs congelés et des échantillons restantes sont hachées pour la préparation des échantillons congelés pression, avec ou sans inhibiteurs de RNAse, de l'ADN, l'ARN, ou l'isolement des protéines. L'objectif global de la procédure de dissection du pancréas est d'échantillonner le pancréas entier, tout en conservant l'orientation anatomique.
L'hétérogénéité des cellules endocrines en termes de composition des îlots, la taille et le nombre est indiqué pour des îlots humains par rapport à 1 îlots de rongeurs. La majorité des îlots humains à partir de la tête du pancréas, les régions du corps et la queue sont composées de l'insuline-containing les cellules ß suivie par de plus faibles proportions de glucagon contenant les alpha-cellules et la somatostatine contenant ô-cellules. Le polypeptide pancréatique des cellules contenant PP et les cellules epsilon ghréline contenant sont également présents mais en petit nombre. En revanche, la région unciforme contient îlots qui sont principalement composées de cellules pancréatiques PP polypeptide contenant 2. Ces variations régionales des îlots de Langerhans proviennent des différences de développement. Le pancréas se développe à partir des bourgeons pancréatiques ventrale et dorsale de l'intestin antérieur et après la rotation de l'estomac et du duodénum, les lobes se déplace ventrales et fusibles avec la 3 dorsale. Le lobe ventrale forme la partie postérieure de la tête y compris le processus unciforme tandis que le lobe dorsale donne lieu à la suite de l'organe. La variation du pancréas régional est également signalé à la région de la queue ayant une densité plus élevée par rapport à l'îlot d'autres régions et les dorsales du lobe dérivés composants qui subissent une atrophie sélective diabète de type 1 <sjusqu'à> 4,5.
Organes et de tissus supplémentaires sont souvent récupérés par les donneurs d'organes et incluent des ganglions lymphatiques du pancréas, la rate et les ganglions lymphatiques non-pancréatiques. Ces échantillons sont récupérés avec des formats similaires à ceux de l'pancréas avec l'addition d'isolement de cellules cryoconservées. Lorsque le duodénum proximal est inclus avec le pancréas, la muqueuse duodénale peuvent être collectées pour des blocs de paraffine et congelées et préparations pression hachés surgelés.
Protocol
Discussion
L'objectif de cette procédure est de définir un traitement pancréas standard qui peut être harmonisé à travers les sites de collecte multiples et permettre ainsi la comparaison des résultats obtenus par les différents groupes. La méthode de dissection est basé sur le standard chirurgicales pratiques de pathologie avec des mesures supplémentaires pour l'annotation des régions importantes du pancréas suivi par voie intra-régionaux subdivisions. Normalisation des méthodes de traitement des échantill…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier les familles des donneurs et des d'approvisionnement en organes impliqués dans cette recherche et Maria Martino et Irina Kusmartseva pour leur aide d'experts. Ce travail a été financé par la Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA) à l'appui du Réseau des donneurs d'organes atteints de diabète pancréatique.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Dissection instruments including scalpels with 22 blades | Various | Various | |
| Centrifuge tubes (15 and 50 ml) | Fisher Scientific | 05-539-5, 430828 | Sterile |
| Cryotubes(1.8 ml) | VWR North America | 89004-300 | Sterile, bar codes optional |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Surgical Pathology Ink | |||
| Cassettes | Mercedes Medical | CAS ECO109 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher Scientific | 23-245-685 | |
| OCT Freezing Media | TissueTek | 4583 | |
| Molds | ThermoScientific | 58952 | Various sizes |
| Isopentane | Fisher Scientific | O3551-4 | OCT chilling bath |
| Dry ice | OCT chilling bath | ||
| Liquid nitrogen in Dewar flask | Snap freezing cryovials | ||
| Cell culture dish (100mm) | Corning | 430167 | Sterile |
| Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | Sterile, store refrigerated, glutamine included |
| Fetal Bovine Serum | Cellgro | 35-010-CV | Sterile, store frozen aliquots |
| Penicillin/Streptomycin/Antifungal | GIBCO | 15240-062 | Sterile, store frozen aliquots |
| Type 9 Paraffin | Richard-Allan Scientific | 8337 | |
| 1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | Sterile |
| 16% Paraformaldehyde | EM Sciences | 15710 | Make fresh, store refrigerated |
| 8% Glutaraldehyde | EM Sciences | 16019 | Make fresh, store refrigerated |
| Biosafety Level 2 hood | Various | ||
| Ultra-low freezer | Various | ||
| Sakura Cassette Printer | Sakura | ||
| Sakura VIP300 | Sakura | Automatic paraffin processor | |
| Paraffin Embedding Station | ThermoFisher |
Table 1. Specific reagents and equipment.
Riferimenti
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