Summary
Este vídeo demonstra um processo para o processamento de dissecção pâncreas humano em formatos de armazenamento. Orientação anatómica é mantida ao longo das regiões pancreáticas para permitir a definição da composição de ilhotas regional e densidade.
Abstract
Esta dissecção e procedimento de amostragem foi desenvolvido para a Rede de Doadores de Órgãos do pâncreas com Diabetes programa (nPOD) para padronizar a preparação do pâncreas recuperado de doadores de órgãos cadáveres. O pâncreas é dividido em 3 regiões principais (cabeça, corpo, cauda), seguido por seriados transversais ao longo do eixo medial para lateral. Secções alternadas são utilizados para parafina fixo e blocos congelados frescos e amostras remanescentes são picados para encaixe preparações amostra congelada, com ou sem inibidores de RNAse, por DNA, RNA, ou o isolamento de proteínas. O objetivo geral do procedimento de dissecção pâncreas é para provar o pâncreas inteiro, mantendo a orientação anatômica.
Heterogeneidade endócrino célula em termos de composição ilhéu, tamanho e número é relatado para ilhotas humanos em comparação com ilhotas de roedores 1. A maioria dos ilhéus humanos a partir da cabeça do pâncreas, regiões do corpo e da cauda são compostos de insulina containin-g beta-células seguido por proporções inferiores de glucagon contendo ct-células e somatostatina-ô-contendo células. Células pancreáticas polipeptídeo contendo PP e células que contêm grelina epsilon também estão presentes, mas em pequenas quantidades. Em contraste, a região uncinado contém ilhotas que são principalmente compostas por células pancreáticas polipéptido contendo 2 pp. Essas variações regionais ilhotas surgem diferenças de desenvolvimento. O pâncreas desenvolve a partir das gemas pancreáticas ventral e dorsal no estômago e depois da rotação do estômago e do duodeno, os movimentos do lóbulo ventral e os fusíveis com o 3 dorsal. O lóbulo ventral forma a porção posterior da cabeça, incluindo o processo uncinado enquanto o lobo dorsal dá origem ao resto do órgão. Variação de pâncreas Regional também é relatado com a região da cauda com maior densidade de ilhota em comparação com outras regiões e os dorsais lobo derivados componentes submetidos a atrofia seletiva na diabetes tipo 1 <saté> 4,5.
Órgãos, tecidos e muitas vezes são recuperadas a partir dos doadores de órgãos e incluir nós pancreáticas linfáticos, baço e gânglios linfáticos não-pancreáticas. Estas amostras são recuperados com os formatos similares às utilizadas para o pâncreas com a adição de isolamento de células criopreservadas. Quando o duodeno proximal está incluído com o pâncreas, mucosa duodenal pode ser recolhida para parafina e congeladas blocos e preparações instantâneas picados congelados.
Protocol
Discussion
O objectivo deste procedimento é definir um processamento pâncreas padrão que pode ser harmonizadas entre os locais de recolha múltiplas e, assim, permitir a comparação dos resultados obtidos por diferentes grupos. O método de dissecção é baseada no padrão cirúrgicos práticas patologia com passos adicionais para anotação das regiões mais importantes do pâncreas seguido por intra-regionais subdivisões. Padronização de métodos de processamento biospecimen é necessário para facilitar a recolha de amo…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores agradecem as famílias dos doadores e as Organizações de Procura de Órgãos envolvidos na pesquisa e Martino Maria e Irina Kusmartseva para a sua assistência especializada. Este trabalho foi financiado pela Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA), em apoio da Rede de Doadores de Órgãos do pâncreas com Diabetes.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Dissection instruments including scalpels with 22 blades | Various | Various | |
| Centrifuge tubes (15 and 50 ml) | Fisher Scientific | 05-539-5, 430828 | Sterile |
| Cryotubes(1.8 ml) | VWR North America | 89004-300 | Sterile, bar codes optional |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Surgical Pathology Ink | |||
| Cassettes | Mercedes Medical | CAS ECO109 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher Scientific | 23-245-685 | |
| OCT Freezing Media | TissueTek | 4583 | |
| Molds | ThermoScientific | 58952 | Various sizes |
| Isopentane | Fisher Scientific | O3551-4 | OCT chilling bath |
| Dry ice | OCT chilling bath | ||
| Liquid nitrogen in Dewar flask | Snap freezing cryovials | ||
| Cell culture dish (100mm) | Corning | 430167 | Sterile |
| Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | Sterile, store refrigerated, glutamine included |
| Fetal Bovine Serum | Cellgro | 35-010-CV | Sterile, store frozen aliquots |
| Penicillin/Streptomycin/Antifungal | GIBCO | 15240-062 | Sterile, store frozen aliquots |
| Type 9 Paraffin | Richard-Allan Scientific | 8337 | |
| 1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | Sterile |
| 16% Paraformaldehyde | EM Sciences | 15710 | Make fresh, store refrigerated |
| 8% Glutaraldehyde | EM Sciences | 16019 | Make fresh, store refrigerated |
| Biosafety Level 2 hood | Various | ||
| Ultra-low freezer | Various | ||
| Sakura Cassette Printer | Sakura | ||
| Sakura VIP300 | Sakura | Automatic paraffin processor | |
| Paraffin Embedding Station | ThermoFisher |
Table 1. Specific reagents and equipment.
Riferimenti
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