La tinción inmunohistoquímica de B7-H1 (PD-L1) en Parafina embebido en diapositivas de tejido pancreático Adenocarcinoma
Summary
B7-H1 (PD-L1) y su unión a PD-1 proporcionan una importante inducida por tumor señal inmunosupresora en el microentorno del tumor. Una técnica de tinción inmunohistoquímica para caracterizar la expresión y localización de B7-H1 en el adenocarcinoma pancreático se describe aquí.
Abstract
B7-H1/PD-L1, un miembro de la familia B7 de inmuno-reguladoras proteínas de la superficie celular, juega un papel importante en la regulación negativa de respuestas mediadas por células inmunes a través de su interacción con su receptor, muerte programada-1 (PD -1) 1,2. La sobreexpresión de B7-H1 por células tumorales se ha observado en un número de cánceres humanos, incluyendo melanoma, glioblastoma, y los carcinomas de pulmón, mama, colon, ovario y células renales, y se ha demostrado que es perjudicial anti-tumorales T- inmunidad de células 3-8.
Recientemente, B7-H1 expresión por los tejidos de adenocarcinoma pancreático se ha identificado como un marcador pronóstico potencial 9,10. Además, el bloqueo de B7-H1 en un modelo de ratón de cáncer de páncreas se ha demostrado que producen una respuesta anti-tumoral 11. Estos datos sugieren la importancia de B7-H1 como una diana terapéutica potencial. Anti-B7-H1 anticuerpos de bloqueo, por lo tanto están probando en ensayos clínicos para mulples tumores humanos sólidos, incluyendo el melanoma y los cánceres de pulmón, colon, riñón, estómago y páncreas 12.
Con el fin de ser finalmente capaz de identificar a los pacientes que se beneficiarán de B7-H1 focalización terapias, es crítico para investigar la correlación entre la expresión y localización de B7-H1 y la respuesta del paciente al tratamiento con anticuerpos de bloqueo B7-H1. Examinar la expresión de B7-H1 en tejidos pancreáticos humanos adenocarcinoma mediante inmunohistoquímica dará una mejor comprensión de cómo esta molécula de señalización co-inhibidora contribuye a la supresión de la inmunidad antitumoral en el microentorno del tumor. El anticuerpo anti-B7-H1 monoclonal (clon 5H1) desarrollado por Chen y colaboradores se ha demostrado que produce resultados fiables de tinción en secciones criogénicas de múltiples tipos de tejidos neoplásicos humanos 4,8, pero la tinción de portaobjetos incluidos en parafina había sido un reto hasta recientemente 13-18. Tenemos devse fugó el B7-H1 tinción protocolo para las diapositivas incrustadas en parafina de los tejidos adenocarcinoma de páncreas. El protocolo de tinción B7-H1 descrito aquí produce tinción consistente membranosa y citoplásmica de B7-H1 con antecedentes.
Protocol
Representative Results
Discussion
La tinción inmunohistoquímica de B7-H1 en criosecciones se ha informado en estudios anteriores para una variedad de cánceres 3,4. Sin embargo, las muestras de tumores clínicas por lo general sólo están disponibles en forma de bloques incluidos en parafina. El anticuerpo monoclonal 5H1 Más recientemente se ha aplicado con éxito a la tinción de tejidos embebidos en parafina de tumores incluyendo carcinoma de células renales, carcinoma cervical, cáncer de vejiga y melanoma 13-18. B7-H1 en l…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
EB, KMB, HX y contribuir por igual. Este estudio fue apoyado por el NCI SPORE en cánceres gastrointestinales P50 CA062924, CA148964 NIH K23, Fundación Lustgarten, Fundación Viragh, Premio Joven Investigador ASCO, NIH 5T32 CA0090701-28 Training Grant, Sol Goldman cáncer de páncreas Center y la Fundación Nacional de páncreas.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
| Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
| Block ACE | Serotec | BUF029 | |
| Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
| Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
| TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
| Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
| 190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
| 200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
| Xylene | VWR | 95057-827 | |
| Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
| Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
| Coverslips | Corning | 2940-245 | |
| Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
| Table 1. Reagents and equipment. |
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