Isolement des lymphocytes utilisant le MAC Miltenyi kit est un moyen fiable pour purifier les cellules de l'ensemble des homogénats de tissu lymphoïde. Les cellules purifiées en utilisant le système Miltenyi sont typiquement ≥ 96% pur. Ici, on justifie les mesures prises pour isoler les cellules CD4 + T, l'une des nombreuses trousses offertes par Miltenyi.
Abstract
Isolement de cellules provenant de la source primaire est une étape nécessaire dans de nombreux protocoles plus complexes. Miltenyi propose des kits d'isoler les cellules de plusieurs organismes, y compris les humains, les primates non humains, le rat et, comme nous le décrivons ici, chez la souris. Séparation magnétique des cellules à base de billes permet soit la sélection positive (ou la déplétion des cellules) ainsi que la sélection négative. Ici, nous démontrons une sélection négative des cellules CD4 avez intacte ou Na + cellules T auxiliaires. En utilisant ce protocole standard, nous purifie généralement les cellules qui sont ≥ 96% de CD4 pur + / CD3 +. Ce protocole est utilisé en conjonction avec le protocole de dissection et de 2-Photon Imaging des ganglions lymphatiques périphériques dans des souris publiée dans le numéro 7 de Jupiter, pour la purification des cellules T et d'autres types cellulaires au adoptive transfert à des fins d'imagerie. Bien que nous n'ayons pas démontrer analyse FACS dans cette vidéo de protocole, il est fortement recommandé de vérifier la pureté globale des cellules isolées en utilisant les anticorps appropriés par FACS. En outre, nous démontrons la méthode non-stériles de l'isolement de lymphocytes T. Si les cellules stériles sont nécessaires pour votre particulière de l'utilisateur final demande, être sûr de faire toutes les procédures ont démontré dans la hotte de culture de tissus dans des conditions standard stériles. Merci pour regarder et bonne chance avec vos propres expériences!
Protocol
S'il vous plaît lire et suivre le protocole inclus dans le kit Miltenyi ou en ligne à http://www.miltenyibiotec.com/ .
Discussion
Isolement de cellules provenant de la source primaire est une étape nécessaire dans de nombreux protocoles plus complexes. Miltenyi propose des kits d'isoler les cellules de plusieurs organismes, y compris les humains, les primates non humains, le rat et, comme nous le décrivons ici, chez la souris. Séparation magnétique des cellules à base de billes permet soit la sélection positive (ou la déplétion des cellules) ainsi que la sélection négative. Ici, nous démontrons une sélection négative des cellules CD4 avez intacte ou …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous tenons à remercier Rebecca Paquett pour la préparation d'un tampon MACS.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
MACS Buffer
Reagent
None
None
Prepare as described by Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation
Reagent
Miltenyi
130-090-860
For use with the Miltenyi system.
Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)
Reagent
For use in the preparation of MACS buffer.
Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish
Altro
Corning Cell Culture Surfaces
430588
Used in the preparation of a single cell suspension.
70 micron Cell Strainer
Tool
BD Falcon
352350
Used in the preparation of a single cell suspension.
6 mL Syringe
Tool
Tyco Healthcare
8881516051
Used in the preparation of a single cell suspension.
Matheu, M. P., Cahalan, M. D. Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification. J. Vis. Exp. (9), e409, doi:10.3791/409 (2007).