Isolering av lymfocyter med Miltenyi MACs kit är ett pålitligt sätt att rena celler från hela lymfatisk vävnad homogenat. Celler renas med hjälp av Miltenyi systemet är vanligen ≥ 96% ren. Här visar vi vilka åtgärder som vidtagits för att isolera CD4 + T-celler, en av de många satser som erbjuds av Miltenyi.
Abstract
Isolering av celler från den primära källan är ett nödvändigt steg i många mer komplexa protokoll. Miltenyi offers kit att isolera celler från flera olika organismer, inklusive människor, icke-mänskliga primater, råtta och som vi beskriver här, möss. Magnetisk pärla-baserade cellseparation tillåter antingen positiv selektion (eller cellbristen) samt negativt urval. Här visar vi negativt urval av orörda eller Na har CD4 + hjälpar T-celler. Med denna standardprotokoll vi normalt renar celler som är ≥ 96% ren CD4 + / CD3 +. Det här protokollet används tillsammans med det protokoll Dissection och 2-Photon Imaging för perifera lymfkörtlar på möss publicerades i nummer 7 av Jove, för rening av T-celler och andra typer cell till adoptively överföring för avbildning ändamål. Även om vi inte visade FACS analys i detta protokoll videon, är det starkt rekommenderas att kontrollera den totala renheten i isolerade celler med hjälp av lämpliga antikroppar via FACS. Dessutom visar vi den icke-steril metod för T-cell isolering. Om sterila celler behövs för just din tillämpning hos slutanvändarna, se till att göra allt de visat förfaranden inom vävnadsodling huven under normala sterila förhållanden. Tack för att titta på och lycka till med dina egna experiment!
Protocol
Läs och följ protokoll som ingår i Miltenyi kit eller online på http://www.miltenyibiotec.com/ .
Discussion
Isolering av celler från den primära källan är ett nödvändigt steg i många mer komplexa protokoll. Miltenyi offers kit att isolera celler från flera olika organismer, inklusive människor, icke-mänskliga primater, råtta och som vi beskriver här, möss. Magnetisk pärla-baserade cellseparation tillåter antingen positiv selektion (eller cellbristen) samt negativt urval. Här visar vi negativt urval av orörda eller Na har CD4 + hjälpar T-celler. Med denna standardprotokoll vi normalt renar celler som är ≥ 96% ren CD4 + / CD3 +…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi vill tacka Rebecca Paquett för beredning av MACS buffert.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
MACS Buffer
Reagent
None
None
Prepare as described by Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation
Reagent
Miltenyi
130-090-860
For use with the Miltenyi system.
Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)
Reagent
For use in the preparation of MACS buffer.
Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish
Altro
Corning Cell Culture Surfaces
430588
Used in the preparation of a single cell suspension.
70 micron Cell Strainer
Tool
BD Falcon
352350
Used in the preparation of a single cell suspension.
6 mL Syringe
Tool
Tyco Healthcare
8881516051
Used in the preparation of a single cell suspension.
Matheu, M. P., Cahalan, M. D. Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification. J. Vis. Exp. (9), e409, doi:10.3791/409 (2007).