Summary

Tillverkning och tillämpning av Rose Bengal-kitosan Films i Laser Tissue Repair

Published: October 23, 2012
doi:

Summary

Suturer behövs vanligen för att reparera vävnad under kirurgiska ingrepp. Däremot kan tillämpningen vara problematiskt eftersom de är invasiva och kan skada vävnad. Tillverkning och tillämpning metoder en ny vävnad bindemedlet här rapporteras. Denna adhesiva film laser-aktiverad och inte kräver användning av suturer.

Abstract

Fotokemisk vävnad bindning (PTB) är en suturfri teknik för vävnadsreparation, vilket uppnås genom att applicera en lösning av Rose Bengal (RB) mellan två vävnad kanter 1,2. Dessa är sedan bestrålas med en laser som selektivt absorberas av RB. De resulterande fotokemiska reaktioner tvärbinder förment kollagenfibrer i vävnaden med minimal värmeproduktion 3. I denna rapport har RB införlivats i tunna kitosan filmer att tillverka en ny vävnad lim som är laser-aktiverad. Adhesiva filmer, baserade på kitosan och innehållande ~ 0,1 vikt% RB, tillverkas och bundna till kalvtarm och råtta tibiala nerver genom en halvledarlaser (λ = 532 nm, Fluence ~ 110 J / cm 2, fläckstorlek ~ 0,5 cm) . En enda kolumn tensiometer, gränssnitt med en persondator, används för att testa bindningsstyrkan. RB-kitosan adhesivbindningar stadigt till tarmen med en styrka av 15 ± 6 kPa (n = 30). Vidhäftningsstyrkan sjunker till 2 &plusmn, 2 kPa (n = 30) när lasern inte appliceras på bindemedlet. Anastomos av nerver tibiala kan också genomföras utan användning av suturer. Ett nytt kitosan bindemedel har tillverkats att obligationer fotokemiskt till vävnad och inte kräver suturer.

Protocol

1. Kitosan Självhäftande Framställning Kitosan pulvret är lösligt i ättiksyralösning, för framställningen av en stamlösning av ättiksyra (2% volym / volym), tillsätt 10 ml isättika till 490 ml avjoniserat vatten (DI-H 2 O). För framställning av en stamlösning av Rose Bengal (RB) (0,01% vikt / volym) i ättiksyra, väger 5 mg RB i en injektionsflaska omlindad med aluminiumfolie för att undvika fotoblekning. Tillsätt 0,5 ml DI-H 2 O för att lösa upp pulvret ti…

Discussion

Rosen adhesiva tillverkning är baserad på en enkel torr gjuten processen, även om upplösningen av RB i surt pH kräver förlängd omrörning av kitosanlösningen. Det är viktigt att låta lösningen torka tills det blir en vattenolöslig film. Detta händer när vikten vattenhalten är ~ 10% i den torkade filmen 6. Olösliga filmer erhålles vanligtvis 2 veckor efter torr-gjutning vid standardförhållanden av temperatur och tryck (~ 25 ° C och ~ 1 atm). Mekanismen av vävnad bindning är inte klart än…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Detta arbete stöddes av UWS forskningsbidrag.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Rose Bengal Sigma-Aldrich 632-69-9
Chitosan (medium MW) Sigma-Aldrich 10318AJ
Glacial acetic acid Sigma-Aldrich 08050051 2% v/v in DI water
Magnetic stirrer Heidolph MR Hei-Mix S
Centrifuge Beckman Coulter Allegra X-12R
Spectrophotometer Varian Cary 4000 UV-Visible
Laser CNI Laser MGL-532
Micrometer Mitutoyo Series 227
Surgical microscope Zeiss OPMI

Riferimenti

  1. O’Neill, A. C., Winograd, J. M. Microvascular anastomosis using a photochemical tissue bonding technique. Lasers Surg. Med. 39, 716-722 (2007).
  2. Yao, M., Yaroslavsky, A. Phototoxicity is not associated with photochemical tissue bonding of skin. Lasers Surg. Med. 42, 123-131 (2010).
  3. Lauto, A., Mawad, D. Photochemical Tissue Bonding with Chitosan Adhesive Films. Biomedical Engineering OnLine. 9, 47 (2010).
  4. Chan, B. P., Kochevar, I. E. Enhancement of porcine skin graft adherence using a light-activated process. J. Surg. Res. 108, 77-84 (2002).
  5. Lauto, A., Faster, L. J. Sutureless nerve repair with laser-activated chitosan adhesive: a pilot in vivo study. Photomed. Laser Surg. 26, 227-234 (2008).
  6. Lauto, A., Hook, J. Chitosan adhesive for laser tissue repair: in vitro characterization. Lasers Surg. Med. 36, 193-201 (2005).
  7. Au, V., Madison, S. A. Effects of singlet oxygen on the extracellular matrix protein collagen: oxidation of the collagen crosslink histidinohydroxylysinonorleucine and histidine. Arch. Biochem. Biophys. 384, 133-142 (2000).
  8. Encinas, M. V., Rufs, A. M. Xanthene dyes/amine as photoinitiators of radical polymerization: A comparative and photochemical study in aqueous medium. Polymer. 13, 2762-2767 (2009).
  9. Pini, R., Rossi, F. A new technique for the closure of the lens capsule by laser welding. Ophtalmic Surgery Lasers & Imaging. 39, 260-2626 (2008).
  10. Wieken, K., Angioi-Duprez, K., Lim, A. Nerve anastomosis with glue: comparative histologic study of fibrin and cyanoacrylate glue. J. Reconstr. Microsurg. 19, 17-20 (2003).
  11. Menovsky, T., Beek, J. F. Laser, fibrin glue, or suture repair of peripheral nerves: a comparative functional, histological, and morphometric study in the rat sciatic nerve. J. Neurosurg. 95, 694-699 (2001).
  12. García, P., Jorge, H. E. Comparative study of the mechanical behavior of a cyanoacrylate and a bioadhesive. J. Mater. Sci. Mater. Med. 15, 109-115 (2004).
  13. Lauto, A. Integration of extracellular matrix with chitosan adhesive film for sutureless tissue fixation. Lasers Surg. Med. 41, 366-371 (2009).

Play Video

Citazione di questo articolo
Lauto, A., Stoodley, M., Barton, M., Morley, J. W., Mahns, D. A., Longo, L., Mawad, D. Fabrication and Application of Rose Bengal-chitosan Films in Laser Tissue Repair. J. Vis. Exp. (68), e4158, doi:10.3791/4158 (2012).

View Video