Summary

溶液中の生体高分子の小型·広角X線散乱による研究

Published: January 08, 2013
doi:

Summary

小さいと広角X線散乱(SWAXS)プロシージャのデモンストレーションは、生体高分子の研究に尽力さとなっています。特定の角度の方法と準備の計装および手順を使用することにより、SWAXSからの実験データは、巨大分子の原子とナノスケールの特性を表示します。

Abstract

本論文では、高分子の小型広角X線散乱(SWAXS)分析は、実験によって実証されています。と広い角度(典型的には> 5°) – SWAXSは、X線を弾性小さな角度(5°典型的には0.1)でのNM-範囲内不均一試料によって散乱されるテクニックです。この手法は、形状、大きさ、高分子、半順序材料、ポアサイズ、表面対体積比の特性距離の分布に関する情報を提供します。広角X線散乱(WAXSが)に基づいて0.33 nmと0.49 nmの間のサンプルのさらに小さいブラッグ間隔を解決できるのに対し、小角X線散乱(SAXS)は、1〜200nmの高分子の構造情報を供給することができます特定のシステムのセットアップおよび検出器。間隔は、ブラッグの法則から決定され、波長と入射角に依存している。

SWAXS実験では、材料は固体であってもよいまたは液体および任意の組み合わせで、同じまたは別の材料の固体、液体または気体のドメイン(いわゆる粒子)が含まれる場合があります。 SWAXSアプリケーションは、非常に広範であり、すべての種類のコロイドが含まれます:金属、複合材、セメント、油、ポリマー、プラスチック、タンパク質、食品、医薬品を。固体試料は、厚さが約5mmに制限されています。

ラボベースSWAXS機器の使用は、この論文に詳述されている。 SWAXSシステムで利用可能なソフトウェア( 例えば 、D. Svergun EMBL-ハンブルクとEasySWAXSソフトウェアによってGNOM-ATSAS 2.3パッケージ)と、実験は、与えられたサンプルについて関心の特定のパラメータを決定するために実施することができます。生体高分子実験の一例としては、選ばれたとの多数の方法により製造することができる水性水性緩衝液中の2重量%のリゾチームの分析である。試料の調製は、サンプル·セクションの準備には、以下のガイドラインに従っています。 SWAXS実験を通して、リゾチームの重要な構造的パラメータ、 例えば回転半径、分析することができます。

Protocol

1。サンプルの調製試料容器から試料の一部を削除するために針を使用します* サンプルで(2.2ミリメートルの最大径)キャピラリーを埋めるために針を使用します。キャピラリーは下から2と3 cmの間埋めなければならない。 その先端にワックスを溶融することによって毛細血管を閉じます。 システムからネジを外し、真空試料ホルダーを。 フューズドエン…

Representative Results

旋回、粒径や形状の半径、溶液構造因子、特定の内表面と細孔径、格子型で、ディメンション、および電子密度1:SAXSとWAXSは完全に次のパラメータを介して試料の構造情報を提供することができます。 SAXSとWAXSは、タンパク質ダイナミクスの研究2に適用することができます。 SWAXS実験の構造情報は、実験的に検出されたスペクトルおよびシステムの計算…

Discussion

SWAXSシステムの比較の手順は、実験的な分析から決定されるべき多くの変数を考慮します。解析から得られているパラメーターは、サンプルと実験のセットアップに応じて、異なる目的に使用することができます。 WAXSが原子とミクロスケールの構造( 例えば分子 ​​格子、単位格子の次元対称性)に焦点を当てているのに対してSAXSは、ナノスケールの大きさと物体の形状に関する?…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々は、グラーツ、オーストリアのオーストリア科学アカデミーで博士フレッドHecusのXRSのKriechbaumと生物物理学やナノシステム研究の研究所に感謝したいと思います。 LLとXWは賞号NRC-38-08から950の下で、ネリ – C賞番号DE-FG07-07ID14889、米国原子力規制委員会の下に、米国エネルギー省によって部分的にサポートされていました。 SWAXS楽器も受賞番号DE-NE0000325の下、米国エネルギー省によって部分的にサポートされています。

Materials

Name of the products Company
The System3 Small- and Wide-Angle X-Ray Scattering (SWAXS) Camera Hecus XRS and IBN,
Graz, Austria
GNOM ATSAS 2.3 package by D. Svergun EMBL-Hamburg

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Citazione di questo articolo
Liu, L., Boldon, L., Urquhart, M., Wang, X. Small and Wide Angle X-Ray Scattering Studies of Biological Macromolecules in Solution. J. Vis. Exp. (71), e4160, doi:10.3791/4160 (2013).

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