Grazie alla combinazione di un lucido e rafforzata sottile cranio (porte) cranica finestra e il glioblastoma (GBM) l'iniezione di cellule, possiamo osservare l'inizio glioma e la crescita di cellule di GBM iniettate nel cervello di un topo vivo longitudinalmente.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Imaging Glioma Iniziazione
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Glioma è una delle forme più letali di cancro umano. La terapia più efficace per glioma data-chirurgia seguita da radioterapia-offre ai pazienti solo benefici modesti, come la maggior parte dei pazienti non sopravvive più di cinque anni dopo la diagnosi a causa di 1,2 glioma ricaduta. La scoperta delle cellule staminali tumorali nei tumori cerebrali umani promette di avere un impatto enorme sullo sviluppo di nuove strategie terapeutiche per il glioma 3. Cellule staminali tumorali sono definite dalla loro capacità sia di auto-rinnovarsi e differenziarsi, e si pensa siano le uniche cellule di un tumore che hanno la capacità di avviare nuovi tumori 4. Glioma radioterapia recidiva seguente è pensato per derivare da resistenza delle cellule staminali di glioma (GSC) alla terapia 5-10. In vivo, GSC sono mostrati di risiedere in una nicchia perivascolare che è importante per mantenere le loro cellule staminali-simili caratteristiche 11-14 . Al centro della organizzazionezione della nicchia GSC sono cellule endoteliali vascolari 12. I dati esistenti suggeriscono che la GSC e la loro interazione con le cellule endoteliali vascolari sono importanti per lo sviluppo del tumore, e identificare GSC e la loro interazione con le cellule endoteliali come importanti bersagli terapeutici per glioma. La presenza di GSC è determinato sperimentalmente in base alla capacità di avviare nuovi tumori upon trapianto ortotopico 15. Questo è in genere ottenuto iniettando un certo numero di cellule isolate da GBM tumori umani nel cervello di gravemente immuno-carente topo, o di cellule di topo GBM nel cervello di topi ospitanti congenici. Saggi di crescita tumorale vengono poi effettuate dopo un tempo sufficiente a consentire GSC tra le cellule iniettate GBM dare origine a nuovi tumori-tipicamente diverse settimane o mesi. Quindi, saggi esistenti non consentono esame del processo patologico importante di iniziazione tumore da GSC singoli in vivo. Di conseguenza, i essenzialensights nei ruoli specifici di GSC e la loro interazione con le cellule endoteliali vascolari nelle prime fasi di iniziazione tumorale mancano. Questi germi di pensiero sono fondamentali per lo sviluppo di nuove strategie terapeutiche per il glioma, e avrà grandi implicazioni per la prevenzione delle recidive nei pazienti con glioma. Qui abbiamo adattato le porte procedura cranica finestra 16 e in vivo a due fotoni microscopia per permettere la visualizzazione di iniziazione del tumore dalle cellule GBM iniettate nel cervello di un topo vivo. La nostra tecnica aprirà la strada per futuri sforzi per chiarire i principali meccanismi di segnalazione tra GSC e cellule endoteliali vascolari durante l'iniziazione glioma.
Protocollo
1. Protocollo
- Anestetizzare il mouse con chetamina e xilazina alla dose di 0,1 mg di ketamina e 0,01 mg di xilazina per 1 g di peso corporeo. Carprofen (0,005 mg per 1 g di peso corporeo) è utilizzato per analgesia e viene somministrato prima dell'intervento.
- Tutti gli strumenti chirurgici, compresa la punta dentale, sono sterilizzati a vapore in autoclave. Se ambulatori lotti devono essere eseguite, le punte di strumenti chirurgici devono essere sterilizzati con una perlina di vetro sterilizzatore (Belle Scienza Strumenti FST 250) prima di ogni intervento chirurgico successivo.
- Una volta che il mouse ha raggiunto un piano chirurgic....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
La chiave per una finestra portuale di successo del cranio è l'assottigliamento e la lucidatura. Mentre il diradamento iniziale può essere eseguita rapidamente, occorre prestare attenzione a garantire assottigliamento omogenea del cranio su una vasta area. Abbiamo tipicamente applicare un sottile strato di soluzione salina al cranio, e quindi un passaggio sottile il cranio alla volta, in modo tale che la soluzione salina evapora poco dopo la microdrill è passato sopra la volta cranica. Questo ci permette di lentamen.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Questo lavoro è supportato da Il Laboratorio pilota di Grant Jackson Cancer Center e The Maine Cancer Foundation.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome del reagente | Azienda | Numero di catalogo | Commenti (opzionale) |
| DMEM/F12 (1:1) con piruvato di sodio | Thermo Sci Hyclone | SH3026101 | |
| B-27 Supplemento Siero gratuita (50x) | Invitrogen | 17504-044 | |
| Glutamax-1 Supplementare | Invitrogen | 35050061 | |
| Penicillina-Streptomicina soluzione | Thermo Sci Hyclone | SV30010 | |
| Accutase-enzima cellulare Medio distacco | eBiosciences | 00-4555-56 | |
| T25 fiaschi-vent tappo verde | SARSTEDT | 83.1810.502 | |
| 70% di alcool | JAX LAHS | ||
| 10% di povidone-iodio soluzione topica | JAX LAHS | ||
| Ketamina HCl | Butler Animal Health di alimentazione | NDC # 11695-0550-1 | |
| Xylazina | Akorn, Inc. | NADA # 139-236 | |
| Carprofen | JAX LAHS | ||
| Unguento oftalmico | Dechra veterinari | 17033-211-38 | |
| 0,5% lidocaina HCl | REGENT, Inc. | NDC 0517-0625-25 | |
| Colla cianoacrilato | Henkel Corp. | 46551 | |
| Tamponi sterili | Fisher Scientific | 23-400-114 | |
| Diamante pasta | Widget di alimentazione | BBE60 | |
| Ossido di stagno | LORTONE, Inc. | 591-038 | |
| Liner Obbligazioni 2V | KURARAY Medical Inc. | 1921-KA | |
| Clearfil AP-X | KURARAY Medical Inc. | 1721-KA | |
| Salino | JAX LAHS | ||
| Copertura in vetro | Warner Instruments | 64-0720 | |
| Dado esagonale | Parti piccole, Inc. | HNX-0090-C | |
| Pompa a siringa | Syringepump.com | NE-1000 | |
| Due-Photon sistema di imaging | Costruito su misura (Qualsiasi sistema commerciale sarebbelavoro) |
Riferimenti
- Paulino, A. C., Teh, B. S. Treatment of brain tumors. N. Engl. J. Med. 352, 2350-2353 (2005).
- Stupp, R., et al. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).
- Singh, S. K., et al.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
