Görüntüleme Glioma Başlatma<em> In Vivo</em> Bir Parlak ve Takviyeli İnce kafatası Kranial Pencere arkası
Summary
Cilalı ve takviyeli ince kafatası (portlar) kraniyal pencere ve glioblastoma (GBM) hücre enjeksiyonu birleştirerek, glioma inisiyasyon ve uzunlamasına bir canlı fare beynindeki enjekte GBM hücreleri büyüme gözlemleyebilirsiniz.
Abstract
Glioma insan kanser en öldürücü biçimlerinden biridir. Tarih-cerrahi en etkili glioma tedavisi arkasından radyoterapi çoğu hastada glioma relaps 1,2 nedeniyle tanıyı takiben beş yıldan fazla hayatta yok gibi, hastalar sadece mütevazı yararları tedavi sunmaktadır. Insan beyin tümörlerinde kanser kök hücrelerinin keşfi glioma 3 için yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi üzerinde büyük bir etkiye sahip için umut vaat ediyor. Kanser kök hücrelerinin yeteneği-kendini yenilemek ve ayırt etmek her ikisi tarafından tanımlanır ve yeni tümörler 4 başlatmak için kapasiteye sahip bir tümör tek hücreler olduğu düşünülmektedir. Glioma nüks aşağıdaki radyoterapi tedavisine glioma kök hücrelerin direncini (GSCs) kaynaklandığı düşünülmektedir 5-10. İn vivo olarak, GSCs kendi kök hücre benzeri özellikler 11-14 korumak için önemli bir perivasküler niş ikamet gösterilir . Kuruluşlar için MerkezGSC niş kıymetleştirme 12 vasküler endotel hücreleri vardır. Mevcut kanıtlar vasküler endotel hücreleri ile GSCs ve etkileşim tümör gelişimi için önemlidir ve glioma için önemli terapötik hedefler olarak endotel hücreleri ile GSCs ve etkileşimi tanımlamak düşündürmektedir. GSCs varlığı ortotopik nakli 15 üzerine yeni tümörler başlatmak için kendi yeteneği ile deneysel olarak belirlenir. Bu durum, tipik insan tümör ciddi bağışıklık eksikliği olan farelerin beyin ya da congenic ev sahibi farelerin beyin içine fare GBM hücre içine izole GBM hücreleri, belirli bir sayıda enjekte edilerek elde edilir. Tümör büyümesi için Tahliller sonra enjekte GBM hücreleri arasındaki GSCs yeni tümörler-genellikle birkaç hafta veya ay çıkması için izin vermek için yeterli zamanı takip yapılmaktadır. Bu nedenle, mevcut testler in vivo tek GSCs tümör inisiyasyon önemli patolojik sürecin incelenmesi izin vermez. Sonuç olarak, temel iTümör inisiyasyon erken dönemlerinde vasküler endotel hücreleri ile GSCs ve etkileşim belirli rolleri nsights eksiktir. Bu tür anlayışlar glioma için yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için kritik önem taşımaktadır ve hastaların glioma nüksü önlemek için büyük etkileri olacaktır. Burada Limanlar kraniyal pencere yordamı 16 uyarladık ve in vivo iki foton mikroskopi canlı fare beynindeki enjekte GBM hücreleri tümör inisiyasyon görüntülenmesine izin verir. Bizim teknik glioma inisiyasyonu sırasında GSCs ve damar endotel hücreleri arasındaki önemli sinyal mekanizmaları aydınlatmak için gelecekteki çabalara yol açacaktır.
Protocol
Discussion
Başarılı Limanlar kraniyal pencere anahtarı inceltme ve parlatma olduğunu. Incelme ilk hızlı yapılabilir iken, bakım geniş bir alana kafatası incelmesi homojen sağlamak için alınmalıdır. Biz genellikle serum fizyolojik mikrotur kez kafatasının geçti kısa bir süre sonra buharlaşır böyle, kafatasına salin ince bir tabaka uygulayın ve ardından ince kafatası tek geçişte bir anda. Bu kafatası bize yavaş fakat homojen daha ince sağlar. Mikroskop altında Kararlı bir yandan da anahtarıdır. K…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser Jackson Laboratuvarı Kanser Merkezi Pilot Hibe ve Maine Kanseri Vakfı tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| DMEM/F12(1:1) with Sodium Pyruvate | Thermo Sci Hyclone | SH3026101 | |
| B-27 Serum Free Supplement (50x) | Invitrogen | 17504-044 | |
| GlutaMax-1 Supplement | Invitrogen | 35050061 | |
| Penicillin-Streptomycin Solution | Thermo Sci Hyclone | SV30010 | |
| Accutase-Enzyme Cell Detachment Medium | eBiosciences | 00-4555-56 | |
| T25 flasks-vent cap green | SARSTEDT | 83.1810.502 | |
| 70% alcohol | JAX LAHS | ||
| 10% povidone-iodine topical solution | JAX LAHS | ||
| Ketamine HCl | Butler Animal Health Supply | NDC# 11695-0550-1 | |
| Xylazine | Akorn, Inc. | NADA# 139-236 | |
| Carprofen | JAX LAHS | ||
| Ophthalmic ointment | Dechra Veterinary Products | 17033-211-38 | |
| 0.5% Lidocaine HCl | REGENT, Inc. | NDC 0517-0625-25 | |
| Cyanoacrylate glue | Henkel Corp. | 46551 | |
| Sterile Swabs | Fisher Scientific | 23-400-114 | |
| Diamond paste | Widget Supply | BBE60 | |
| Tin oxide | LORTONE, Inc. | 591-038 | |
| Liner Bond 2V | KURARAY Medical Inc. | 1921-KA | |
| Clearfil AP-X | KURARAY Medical Inc. | 1721-KA | |
| Saline | JAX LAHS | ||
| Cover glass | Warner Instruments | 64-0720 | |
| Hex Nut | Small Parts, Inc. | HNX-0090-C | |
| Syringe Pump | Syringepump.com | NE-1000 | |
| Two-Photon imaging system | Custom built (Any commercial system would work) |
Riferimenti
- Paulino, A. C., Teh, B. S. Treatment of brain tumors. N. Engl. J. Med. 352, 2350-2353 (2005).
- Stupp, R., et al. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).
- Singh, S. K., et al. Identification of human brain tumour initiating cells. Nature. 432, 396-401 (2004).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144, 646-674 (2011).
- Cheng, L., Bao, S., Rich, J. N. Potential therapeutic implications of cancer stem cells in glioblastoma. Biochem. Pharmacol. 80, 654-665 (2010).
- Cheng, L., Ramesh, A. V., Flesken-Nikitin, A., Choi, J., Nikitin, A. Y. Mouse models for cancer stem cell research. Toxicol. Pathol. 38, 62-71 (2010).
- Dirks, P. B. Brain tumor stem cells: the cancer stem cell hypothesis writ large. Mol. Oncol. 4, 420-430 (2010).
- Ebben, J. D., et al. The cancer stem cell paradigm: a new understanding of tumor development and treatment. Expert Opin. Ther. Targets. 14, 621-632 (2010).
- Germano, I., Swiss, V., Casaccia, P. Primary brain tumors, neural stem cell, and brain tumor cancer cells: where is the link. Neuropharmacology. 58, 903-910 (2010).
- Park, D. M., Rich, J. N. Biology of glioma cancer stem cells. Mol. Cells. 28, 7-12 (2009).
- Bao, S., et al. Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor. Cancer Res. 66, 7843-7848 (2006).
- Calabrese, C., et al. A perivascular niche for brain tumor stem cells. Cancer Cell. 11, 69-82 (2007).
- Barami, K. Relationship of neural stem cells with their vascular niche: implications in the malignant progression of gliomas. J. Clin. Neurosci. 15, 1193-1197 (2008).
- Gilbertson, R. J., Rich, J. N. Making a tumour’s bed: glioblastoma stem cells and the vascular niche. Nat. Rev. Cancer. 7, 733-736 (2007).
- Cho, R. W., Clarke, M. F. Recent advances in cancer stem cells. Curr. Opin. Genet. Dev. 18, 48-53 (2008).
- Drew, P. J., et al. Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull. Nat. Methods. 7, 981-984 (2010).
