3次元樹脂鋳造およびマウスの門脈や肝内胆管系の結
Summary
マウスの肝門脈や肝内胆管の3次元構造を可視化し、定量化する方法が記載されている。このレジンキャスト技術は、他の管または血管系に適用し、可能にすることができます<em>その場で</em>システムの完全な通信アーキテクチャの可視化や定量化。
Abstract
臓器、血管および腺管構造の正しいアーキテクチャーは、適切な生理的機能のために不可欠であり、これらの構造体の形成と維持には、高度に制御されたプロセスである。これらの複雑な3次元構造の解析が大幅にセクションまたは染料注入試験のいずれかで2次元検査に依存してきた。これらの技術は、しかし、彼らは明らかにすることを意図している乳管や血管構造の完全かつ定量的な表現を提供することができません。あるいは、3次元プラスチック樹脂キャストの性質は、システムの永続的なスナップショットを作成し、3次元構造とネットワークを可視化し、定量化するための新規かつ広く有用な技術である。
樹脂鋳造システムの重要な利点は、血管やダクトの無傷と接続、または通信し、構造を決定する機能です。血管とDUCの構造TALネットワークは臓器の機能に不可欠であり、この手法にはいくつかの方法で、血管や管網の研究を支援する可能性を秘めています。レジンキャストは、管腔構造の正常な形態と機能アーキテクチャを分析発達形態形成の変化を識別し、正常と病気の状態間の組織構造の形態学的差異を明らかにするために使用することができる。前の仕事は、たとえば、勉強する注型用樹脂を利用している、構造1,2の2次元解析に反映されませんでしたマウスの肝内胆管系内のアーキテクチャと機能の欠陥、アルツハイマー病マウスモデル3の脳血管系の変化、門脈圧亢進性と肝硬変マウス4、未熟と大人の肺の間のラットのリンパ成熟の発達のステップ5、薬害への応答におけるラット肝臓、膵臓、腎臓の即時微小変化で門脈の異常6。
ここでは、門脈と肝内胆管に特に焦点を当て、マウスの血管や管網の3次元レジンキャストを生成する方法を提示します。これらのキャストは、組織をクリアしたり、マセレーションにより可視化することができますし、分析することができます。この手法は、実質的に任意の血管や管システムに適用することができ、3次元の乳管や血管構造の開発、機能、保守、または傷害に問い合わせるどんな研究に直接適用できるであろう。
Protocol
1。カニューレを準備指先でPE10チューブの1インチの長いセクションを温めるとチューブが薄くなるように、それを伸ばす。 注意：カニューレを挿入する血管やダクトのサイズが必要なストレッチの度合いを決定します。カニューレを胆管キャストのためによく伸ばさなければなりませんが、適度に大きい門脈内に収まるように延伸することが必要になることがあります。…
Discussion
我々は、肝臓の門脈および肝内胆管系はキャストすることができますが、この技術は若干の適応と他のほとんどすべての乳管や血管系にどのように適用できるかの具体例を記載している。前の仕事は10,11子ガモマウス1,2,7-9を含む複数種、、、ウサギ12,13、犬14、豚15、および鼻腺14を含む多くの器官における本手法の有効性を実証してきま?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、分子医学におけるHHMI /バンダービルト大学の証明書プログラムを通じてハワードヒューズ医学研究所（HHMI）からTJWにSSHで接続するには、米国立衛生研究所（NIH）からの助成金（R01-DK078640）、（GRDOT56006779）によってサポートされていましたバンダービルト糖尿病研究·研修センター（P30〜DK020593）とコア·サービスを提供するバンダービルト消化器病研究センター（P30〜DK058404）。
Materials
| Name of reagent | Company | Catalog number | Comments |
| PE10 polyethylene tubing | Fisher Scientific | 1417012P | |
| 5-0 surgical black braided silk | Roboz Surgical | SUT-15-1 | |
| Steriject 32 G x 13 mm needle | Air-tite | TSK3213 | |
| Spring scissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Number 5 forceps | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Mercox II kit | Ladd Research | 21247 | |
| Benzyl alcohol | Fisher Scientific | 1816-04 | Only required for BABB-clearing |
| Benzyl benzoate | MP Biomedicals, LLC | 154839 | Only required for BABB-clearing |
| Phosphate-buffered saline (PBS) | |||
| Modeling clay | |||
| Scale | |||
| Laboratory scissors | |||
| 15 ml cap polypropylene tubes | |||
| 4% paraformaldahyde | |||
| 15% potassium hydroxide (KOH) | Only required for maceration | ||
| Razor blade | |||
| 100% methanol | |||
| 3 ml luer lock syringe |
References
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Cite This Article
Walter, T. J., Sparks, E. E., Huppert, S. S. 3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System. J. Vis. Exp. (68), e4272, doi:10.3791/4272 (2012).