Orthotopic Aorta Transplantasjon i Mus for studiet av vaskulær sykdom

Summary

Vi beskriver en teknikk der en seksjon av abdominal aorta fra en mus er transplantert orthotopically til like under de renale arterier i en allogen eller syngeneic mottaker. Denne teknikken kan være nyttig i studier hvor transplantasjon av store arterier av lik størrelse anses fordelaktig.

Abstract

Vaskulære prosedyrer som involverer anastomoser i musen er generelt antatt å være vanskelig og svært avhengig dyktighet av enkelte operatør. Dette er i stor grad sant, men det er en rekke av viktige prinsipper som kan redusere vanskeligheten av disse rutinene og forbedre reproduserbarheten. Orthotopic aorta transplantasjon er en utmerket prosedyre der for å lære disse prinsippene fordi det innebærer bare to ende-til-ende anastomoser, men krever god suturing teknikk og håndtering av fartøyene for konsekvent suksess. Denne prosedyren begynner med anskaffelse av en lengde av abdominal aorta fra en donor dyr, fulgt av delingen av de innfødte aorta i mottakeren. Den anskaffet aorta plasseres deretter mellom de delte ender av mottakerens aorta og sutureres på plass ved hjelp av ende-til-ende anastomoser. For å oppnå dette målet vellykket krever en høy grad av konsentrasjon, gode verktøy, en stødig hånd, og en styrking av hvor lettvaskulatur av en mus kan bli skadet, noe som resulterer i trombose. Lære disse viktige prinsippene er hva opptar det meste av nybegynner tid når man lærer mikrokirurgi i små gnagere. Gjennom denne protokollen, henviser vi til disse viktige punktene. Denne modellen kan brukes til å studere vaskulær sykdom i en rekke forskjellige eksperimentelle systemer ^1-8. I sammenheng vist her, er det oftest brukt for studiet av post-transplantasjon vaskulær sykdom, en felles langsiktig komplikasjon av organtransplantasjon der intimal hyperplasi oppstår innenfor allograft. Den primære fordelen med den modellen er at det letter kvantitative morfometriske analyser og transplanterte fartøyet ligger tilstøtende til den endogene fartøyet, som kan tjene som en ekstra kontroll ^9. Teknikken som vises her er oftest brukt for mus veier 18-25 gram. Vi har samlet de fleste av vår erfaring med C57BL/6J, BALB / CJ, og C3H/HeJ stammer.

Protocol

1. Presurgical Forberedelse Kirurgiske prosedyrer, uansett hvor nøye gjort, fører til betydelig stress. For å minimere virkningene av slik belastning og for å maksimere reserver, bør dyrene holdes i vivarium minst 72 timer før bruk 10,11. Kirurgisk verktøy, gasbind, og vattpinner må være sterile. Det er ikke nødvendig å bruke sterile hansker tilby bare tuppene av instrumenter berøring sutur eller operative feltet. For hemostase, er det viktig at clamping presset er m…

Representative Results

Figur 1 viser en pulsåretransplantasjonen. De hvite pilene betegne suture linjene. Et patent pode viser en synlig puls. Fig. 2 indikerer et typisk eksperiment hvor mottaker overlevelse ble fulgt i en periode på 56 dager. En gruppe besto av vill-type (C57BL / 6 x FVB) mottaker mus transplantert med BALB / c aorta. Den andre gruppen, betegnet "KO" består av mottakere (C57BL / 6 x FVB) mangelfull i uttrykk av heme oxygenase-1, noe som resulterer i trombose av grafts innen 24 t…

Discussion

Musemodeller av aorta transplantasjon gir en rekke fordeler fordi mus er svært godt definert immunogenetically ^9,12,13, og de ​​kan lett manipuleres til å endre sitt uttrykk av spesifikke gener, om ønskelig. Som nevnt i innledningen, er vaskulær kirurgi hos mus vanskeligere enn de fleste modeller på grunn av størrelsen av skipene. Selv store arterier, som aorta er vanligvis ikke mer enn 100 til 200 mikrometer i indre diameter, så manipulere disse fartøyene krever en betydelig mengde av dyktighet o…

Materials

Item	Company	Catalog No.
Vascular Clamps	Fine Science Tools	00396-01 (Size B-1)
Dumont Forceps	Fine Science Tools	11293-00
10-0 Needled microsuture	AROSurgical	TK-107038
Straight scissors	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5620
Low temperature cauterizer	Beaver-Visitec International	8441000
Self retaining retractor	World Precision Instruments	14240